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這種內(nèi)含玻璃奶的膜，也就是GENECLEAN® Turbo的濾膜，位于GENECLEAN® Turbo吸附柱的底部。上樣后，液體穿過濾膜，流到收集管或真空歧管中。吸附柱蓋子的設(shè)計(jì)特別巧妙，請(qǐng)看下圖。吸附柱與收集管組裝之后，蓋上蓋子，從上 面看下去，有兩個(gè)孔。#1孔是加樣孔，液體經(jīng)由這個(gè)孔加到濾膜上。#2孔是廢液孔，使用接有真空裝置的針頭就能將廢液輕松吸走。這樣，手工操作就更簡(jiǎn)單 了，在洗滌和洗脫的過程中，連開蓋、關(guān)蓋這樣的活都省了。別小看開關(guān)蓋，樣品多的話，大拇指可特別遭罪。 整個(gè)操作過程也很簡(jiǎn)單：溶膠（PCR產(chǎn)物無需溶膠，直接加入5倍體積的鹽溶液）后，上樣 到吸附柱中，離心5秒；再加入洗滌液，離心5秒；之后是空轉(zhuǎn)離心4分鐘，干燥吸附柱；最后加上洗脫液，室溫孵育5分鐘，離心1分鐘，搞定。洗滌這一步能去 除瓊脂糖、限制性內(nèi)切酶、反轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶、T4連接酶、引物、接頭、EB、鹽以及殘留的有機(jī)溶劑。 于是，大片段DNA的回收也能像小片段一樣，在十幾分鐘的時(shí)間內(nèi)輕松完成。100 bp到300 kb的DNA片段都不在話下。當(dāng)然，如果片段很大，還是要特別溫柔的，畢竟它們很脆弱。回收后的DNA純度很高，可用于測(cè)序、克隆、PCR、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染、 顯微注射、芯片分析等應(yīng)用。 對(duì)于芯片分析、測(cè)序和PCR等應(yīng)用而言，高通量的樣品處理形式可能更為理想。 GENECLEAN® Turbo 96就是高通量的版本。它在96孔板中使用了膜包被的GENECLEAN® Turbo基質(zhì)，純化后的物質(zhì)洗脫在可密封的96孔收集板中。整個(gè)純化過程在45分鐘以內(nèi)完成。 有了GENECLEAN® Turbo Kit，大片段DNA的回收不再是實(shí)驗(yàn)的瓶頸了。你也不用對(duì)著100多kb的片段，一籌莫展啦。
如果你正面臨這難題，就趕快聯(lián)系MP公司中國(guó)銷售商北京畢特博生物技術(shù)有限責(zé)任公司索取該試劑盒的技術(shù)資料吧。 或者電話 400-833-9299/13366202681/010-82015225
針對(duì)大片段DNA的回收，美國(guó)MP Bio公司新推出了改進(jìn)版的玻璃奶試劑盒—GENECLEAN(R) Turbo Kit，能從瓊脂糖凝膠、PCR反應(yīng)和其它酶切反應(yīng)中簡(jiǎn)單快速地回收300 kb以下的DNA片段。 與幾十kb甚至上百kb的大片段打交道就是麻煩，一不留神它就斷了。最早采用的經(jīng)典方法 電洗脫和低熔點(diǎn)瓊脂糖能很好地回收大片段，但是操作起來相當(dāng)繁瑣，非理想之選。而當(dāng)今常規(guī)的硅膠膜離心過柱法也不適合大片段DNA的回收。因?yàn)镈NA分子 越長(zhǎng)，與硅膠純化膜的結(jié)合力越強(qiáng)，洗脫困難，導(dǎo)致在離心過柱時(shí)就很容易斷裂，因此仔細(xì)看說明書，你會(huì)發(fā)現(xiàn)采用硅膠膜離心過柱技術(shù)的DNA片段回收試劑盒一 般只適用于10kb以下的片段（就算有說能做20kb的，往往也會(huì)發(fā)現(xiàn)結(jié)果不好，且回收率低）。對(duì)于超大片段的DNA回收，負(fù)責(zé)的廠家會(huì)建議采用 Glassmilk玻璃奶，或者類似的硅膠微珠懸液。 玻璃奶法相對(duì)離心過柱法更為靈活，可以根據(jù)每次回收實(shí)驗(yàn)時(shí)預(yù)期回收量來調(diào)整純化填料的 量，使得實(shí)驗(yàn)不受限于柱子的載量，也不會(huì)造成浪費(fèi)。膠回收的步驟都一樣，凝膠溶解后，加入純化填料吸附混合，快速離心沉淀去上清，洗滌之后干燥沉淀，最后 用洗脫液將吸附的片段釋放出來，離心，取上清，就是回收的產(chǎn)物。這種方法通用型強(qiáng)，適合各種不同大小的片段，特別是大片段的回收，而且可以適當(dāng)自行調(diào)節(jié)洗 脫體積而決定洗脫產(chǎn)物濃度，價(jià)格實(shí)惠，可就是操作就復(fù)雜一些：一個(gè)是沉淀干燥，干燥過度會(huì)導(dǎo)致洗脫困難回收率低下，可干燥不足又會(huì)殘留乙醇而妨礙后繼實(shí) 驗(yàn)，連帶檢測(cè)OD值都受影響。這何謂合適，還真沒準(zhǔn)頭——計(jì)算時(shí)間好像也不怎么完全可靠，室溫濕度不同時(shí)間也就有差異，因此全憑一雙肉眼經(jīng)驗(yàn)判斷。你說那 么不靠譜的事兒，一個(gè)實(shí)驗(yàn)新手，得反復(fù)折騰多少回浪費(fèi)多少材料和精力才能掌握那經(jīng)驗(yàn)啊。。。因此這產(chǎn)物的純度也自然不會(huì)太高。另一個(gè)問題是取上清，洗脫液 重懸后離心沉淀，取上清雖微不足道可也是個(gè)技術(shù)活兒，Glassmilk也好，硅膠微珠也好都輕細(xì)如塵，吸取稍多點(diǎn)稍微快點(diǎn)就不小心把它們吸進(jìn)去了，又得 重來，不然混入后繼實(shí)驗(yàn)委實(shí)夠你受的，取少了浪費(fèi)多回收率低又難免心有不甘。這時(shí)你就會(huì)覺得離心柱是一種多么可愛省心的發(fā)明呀！ 針對(duì)這個(gè)問題，美國(guó)MP Bio公司新推出了改進(jìn)版的玻璃奶試劑盒—GENECLEAN® Turbo Kit，能從瓊脂糖凝膠、PCR反應(yīng)和其它酶切反應(yīng)中簡(jiǎn)單快速地回收300 kb以下的DNA片段。 也許你還不知道，GENECLEAN® 系列早在1986年就已問世，是最早利用玻璃奶特異結(jié)合DNA的商業(yè)化產(chǎn)品。GENECLEAN® Turbo Kit則是GENECLEAN® 產(chǎn)品家族的最新成員。它同樣是基于玻璃奶結(jié)合DNA的高效性，但Turbo結(jié)合基質(zhì)包被在一種特殊的復(fù)合膜中。 Glassmilk或者硅膠微珠都具有松散的立體結(jié)構(gòu)可以全方位包被DNA分子而避免大 片段牽扯斷裂，但是松散的結(jié)構(gòu)使得在離心沉降過程中粒子沉降速度差異和相對(duì)位置不固定，對(duì)于會(huì)吸附到多個(gè)微粒的更大片段來說也會(huì)導(dǎo)致斷裂，通常適合 10-50kb的片段，而固定在復(fù)合膜中的Glassmilk可以減少這個(gè)問題，GENECLEAN® Turbo Kit回收片段最大可達(dá)300kb。
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