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這種內含玻璃奶的膜,也就是GENECLEAN® Turbo的濾膜,位于GENECLEAN® Turbo吸附柱的底部。上樣后,液體穿過濾膜,流到收集管或真空歧管中。吸附柱蓋子的設計特別巧妙,請看下圖。吸附柱與收集管組裝之后,蓋上蓋子,從上 面看下去,有兩個孔。#1孔是加樣孔,液體經由這個孔加到濾膜上。#2孔是廢液孔,使用接有真空裝置的針頭就能將廢液輕松吸走。這樣,手工操作就更簡單 了,在洗滌和洗脫的過程中,連開蓋、關蓋這樣的活都省了。別小看開關蓋,樣品多的話,大拇指可特別遭罪。 整個操作過程也很簡單:溶膠(PCR產物無需溶膠,直接加入5倍體積的鹽溶液)后,上樣 到吸附柱中,離心5秒;再加入洗滌液,離心5秒;之后是空轉離心4分鐘,干燥吸附柱;最后加上洗脫液,室溫孵育5分鐘,離心1分鐘,搞定。洗滌這一步能去 除瓊脂糖、限制性內切酶、反轉錄酶、Taq酶、T4連接酶、引物、接頭、EB、鹽以及殘留的有機溶劑。 于是,大片段DNA的回收也能像小片段一樣,在十幾分鐘的時間內輕松完成。100 bp到300 kb的DNA片段都不在話下。當然,如果片段很大,還是要特別溫柔的,畢竟它們很脆弱。回收后的DNA純度很高,可用于測序、克隆、PCR、轉化、轉染、 顯微注射、芯片分析等應用。 對于芯片分析、測序和PCR等應用而言,高通量的樣品處理形式可能更為理想。 GENECLEAN® Turbo 96就是高通量的版本。它在96孔板中使用了膜包被的GENECLEAN® Turbo基質,純化后的物質洗脫在可密封的96孔收集板中。整個純化過程在45分鐘以內完成。 有了GENECLEAN® Turbo Kit,大片段DNA的回收不再是實驗的瓶頸了。你也不用對著100多kb的片段,一籌莫展啦。
如果你正面臨這難題,就趕快聯系MP公司中國銷售商北京畢特博生物技術有限責任公司索取該試劑盒的技術資料吧。 或者電話 400-833-9299/13366202681/010-82015225
針對大片段DNA的回收,美國MP Bio公司新推出了改進版的玻璃奶試劑盒—GENECLEAN(R) Turbo Kit,能從瓊脂糖凝膠、PCR反應和其它酶切反應中簡單快速地回收300 kb以下的DNA片段。 與幾十kb甚至上百kb的大片段打交道就是麻煩,一不留神它就斷了。最早采用的經典方法 電洗脫和低熔點瓊脂糖能很好地回收大片段,但是操作起來相當繁瑣,非理想之選。而當今常規的硅膠膜離心過柱法也不適合大片段DNA的回收。因為DNA分子 越長,與硅膠純化膜的結合力越強,洗脫困難,導致在離心過柱時就很容易斷裂,因此仔細看說明書,你會發現采用硅膠膜離心過柱技術的DNA片段回收試劑盒一 般只適用于10kb以下的片段(就算有說能做20kb的,往往也會發現結果不好,且回收率低)。對于超大片段的DNA回收,負責的廠家會建議采用 Glassmilk玻璃奶,或者類似的硅膠微珠懸液。 玻璃奶法相對離心過柱法更為靈活,可以根據每次回收實驗時預期回收量來調整純化填料的 量,使得實驗不受限于柱子的載量,也不會造成浪費。膠回收的步驟都一樣,凝膠溶解后,加入純化填料吸附混合,快速離心沉淀去上清,洗滌之后干燥沉淀,最后 用洗脫液將吸附的片段釋放出來,離心,取上清,就是回收的產物。這種方法通用型強,適合各種不同大小的片段,特別是大片段的回收,而且可以適當自行調節洗 脫體積而決定洗脫產物濃度,價格實惠,可就是操作就復雜一些:一個是沉淀干燥,干燥過度會導致洗脫困難回收率低下,可干燥不足又會殘留乙醇而妨礙后繼實 驗,連帶檢測OD值都受影響。這何謂合適,還真沒準頭——計算時間好像也不怎么完全可靠,室溫濕度不同時間也就有差異,因此全憑一雙肉眼經驗判斷。你說那 么不靠譜的事兒,一個實驗新手,得反復折騰多少回浪費多少材料和精力才能掌握那經驗啊。。。因此這產物的純度也自然不會太高。另一個問題是取上清,洗脫液 重懸后離心沉淀,取上清雖微不足道可也是個技術活兒,Glassmilk也好,硅膠微珠也好都輕細如塵,吸取稍多點稍微快點就不小心把它們吸進去了,又得 重來,不然混入后繼實驗委實夠你受的,取少了浪費多回收率低又難免心有不甘。這時你就會覺得離心柱是一種多么可愛省心的發明呀! 針對這個問題,美國MP Bio公司新推出了改進版的玻璃奶試劑盒—GENECLEAN® Turbo Kit,能從瓊脂糖凝膠、PCR反應和其它酶切反應中簡單快速地回收300 kb以下的DNA片段。 也許你還不知道,GENECLEAN® 系列早在1986年就已問世,是最早利用玻璃奶特異結合DNA的商業化產品。GENECLEAN® Turbo Kit則是GENECLEAN® 產品家族的最新成員。它同樣是基于玻璃奶結合DNA的高效性,但Turbo結合基質包被在一種特殊的復合膜中。 Glassmilk或者硅膠微珠都具有松散的立體結構可以全方位包被DNA分子而避免大 片段牽扯斷裂,但是松散的結構使得在離心沉降過程中粒子沉降速度差異和相對位置不固定,對于會吸附到多個微粒的更大片段來說也會導致斷裂,通常適合 10-50kb的片段,而固定在復合膜中的Glassmilk可以減少這個問題,GENECLEAN® Turbo Kit回收片段最大可達300kb。
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