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生物資訊

無(wú)血清培養(yǎng)法初步富集人結(jié)腸癌Caco-2干細(xì)胞的研究

作者:中南大學(xué)湘雅醫(yī)院 來(lái)源:2012CCDD 發(fā)布時(shí)間: 2014-07-18 10:38  瀏覽次數(shù):
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目的 通過(guò)無(wú)血清培養(yǎng)法初步富集人結(jié)腸癌Caco-2干細(xì)胞,并探討其可行性,以期為Caco-2干細(xì)胞的有效分選方法提供一種思路,為結(jié)腸癌的研究構(gòu)建一種新的干細(xì)胞模型。耐藥性,行免疫熒光染色檢測(cè)結(jié)腸癌干細(xì)胞特異性標(biāo)記物CD133的表達(dá)。腫瘤干細(xì)胞球,并能連續(xù)傳代,將其重懸于含血清培養(yǎng)基后,能分化成貼壁的單層細(xì)胞;Caco-2腫瘤干細(xì)胞球可在含血清培養(yǎng)基和無(wú)血清培養(yǎng)基的交替培養(yǎng)中發(fā)生相應(yīng)轉(zhuǎn)化;耐藥實(shí)驗(yàn)顯示一部分Caco-2腫瘤干細(xì)胞球來(lái)源的單細(xì)胞能在添加了化療藥物的無(wú)血清培養(yǎng)基中存活并重新增殖成球,無(wú)藥物干預(yù)組、5-氟尿嘧啶干預(yù)組、奧沙利鉑干預(yù)組、5-氟尿嘧啶聯(lián)合奧沙利鉑干預(yù)組形成的Caco-2腫瘤干細(xì)胞球的數(shù)目分別為:(10.0±1.15)個(gè)/孔、(16.1±1.52)個(gè)/孔、(17.5±1.43)個(gè)/孔、(18.8±1.14)個(gè)/孔,4組的成球數(shù)都存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P< 0.05):5-氟尿嘧啶聯(lián)合奧沙利鉑干預(yù)組>奧沙利鉑干預(yù)組>5-氟尿嘧啶干預(yù)組>無(wú)藥物干預(yù)組;免疫熒光染色顯示Caco-2腫瘤干細(xì)胞球呈現(xiàn)橙紅色熒光,即為CD133陽(yáng)性表達(dá)。

  方法 將人結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞接種于無(wú)血清培養(yǎng)基中以初步富集Caco-2干細(xì)胞,觀察其生長(zhǎng)增殖過(guò)程,通過(guò)含血清培養(yǎng)基和無(wú)血清培養(yǎng)基交替培養(yǎng)誘導(dǎo)其分化,利用5-氟尿嘧啶、奧沙利鉑驗(yàn)證其

  結(jié)果 一部分Caco-2細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中逐漸增殖形成懸浮的

  結(jié)論 人結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞可以在無(wú)血清培養(yǎng)基中形成懸浮的腫瘤干細(xì)胞球,它具有自我更新、不斷增殖、分化和耐藥的能力,能表達(dá)結(jié)腸癌干細(xì)胞特異性標(biāo)記物CD133;無(wú)血清培養(yǎng)聯(lián)合化療藥物干預(yù)比單純采用無(wú)血清培養(yǎng)有利于Caco-2干細(xì)胞的富集,奧沙利鉑的富集效率高于5-氟尿嘧啶,二者聯(lián)用的富集效率高于單藥;通過(guò)無(wú)血清培養(yǎng)法可以初步富集到人結(jié)腸癌Caco-2干細(xì)胞的樣細(xì)胞。

  (摘自2012中國(guó)消化系疾病學(xué)術(shù)大會(huì)論文集)

 

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