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生物資訊

無血清培養法初步富集人結腸癌Caco-2干細胞的研究

作者:中南大學湘雅醫院 來源:2012CCDD 發布時間: 2014-07-18 10:38  瀏覽次數:
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目的 通過無血清培養法初步富集人結腸癌Caco-2干細胞,并探討其可行性,以期為Caco-2干細胞的有效分選方法提供一種思路,為結腸癌的研究構建一種新的干細胞模型。耐藥性,行免疫熒光染色檢測結腸癌干細胞特異性標記物CD133的表達。腫瘤干細胞球,并能連續傳代,將其重懸于含血清培養基后,能分化成貼壁的單層細胞;Caco-2腫瘤干細胞球可在含血清培養基和無血清培養基的交替培養中發生相應轉化;耐藥實驗顯示一部分Caco-2腫瘤干細胞球來源的單細胞能在添加了化療藥物的無血清培養基中存活并重新增殖成球,無藥物干預組、5-氟尿嘧啶干預組、奧沙利鉑干預組、5-氟尿嘧啶聯合奧沙利鉑干預組形成的Caco-2腫瘤干細胞球的數目分別為:(10.0±1.15)個/孔、(16.1±1.52)個/孔、(17.5±1.43)個/孔、(18.8±1.14)個/孔,4組的成球數都存在統計學差異(P< 0.05):5-氟尿嘧啶聯合奧沙利鉑干預組>奧沙利鉑干預組>5-氟尿嘧啶干預組>無藥物干預組;免疫熒光染色顯示Caco-2腫瘤干細胞球呈現橙紅色熒光,即為CD133陽性表達。

  方法 將人結腸癌Caco-2細胞接種于無血清培養基中以初步富集Caco-2干細胞,觀察其生長增殖過程,通過含血清培養基和無血清培養基交替培養誘導其分化,利用5-氟尿嘧啶、奧沙利鉑驗證其

  結果 一部分Caco-2細胞在無血清培養基中逐漸增殖形成懸浮的

  結論 人結腸癌Caco-2細胞可以在無血清培養基中形成懸浮的腫瘤干細胞球,它具有自我更新、不斷增殖、分化和耐藥的能力,能表達結腸癌干細胞特異性標記物CD133;無血清培養聯合化療藥物干預比單純采用無血清培養有利于Caco-2干細胞的富集,奧沙利鉑的富集效率高于5-氟尿嘧啶,二者聯用的富集效率高于單藥;通過無血清培養法可以初步富集到人結腸癌Caco-2干細胞的樣細胞。

  (摘自2012中國消化系疾病學術大會論文集)

 

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