作者：劉建國 袁惠德 陳祥云 周海敏
【關鍵詞】 注射用鹽酸阿霉素
【摘要】 目的 考察了35批注射用鹽酸阿霉素的細菌內毒素檢查法可行性。 方法 《中國藥典》2000年版細菌內毒素檢查法。 結果 本品濃度大于2.5mg/ml有干擾作用。 結論 只要把檢品稀釋為2.5mg/ml選用靈敏度為0.5EU/ml的鱟試劑可用細菌內毒素檢查。
【關鍵詞】 注射用鹽酸阿霉素;細菌內毒素;鱟試劑;熱原;抑制/增加試驗
Study on BET feasibility of doxorubicin hydrochloride with LAL
LIU Jian-guo，YUANHui-de，CHEN Xiang-yun，et al.
Zhejiang Taizhou Prefectural Institute for Drug Control，Zhejinag318000，China
【Abstract】 Objective To inspect on the feasibility of bacterial endotoxin test（BET）for thirty-five batches of doxorubicin hydorchloride for Inj.Methods BET of China pharmacopoeia.Results Interferential effect was shown on the density above2.5mg/ml.Conclusion The dilution of2.5mg/ml could be tested by limulus amebocyte lysate with the sensitivity of0.5EU/ml.
【Key words】 dexorubicin hydrochloride for inj;bacterial endotoxin;limulus amebocyte lysate（LAL）inhibition/strengthen test;pyrogen
注射用鹽酸阿霉素，USP23版早已收載用細菌內毒素進行檢測。我國除《浙江省藥品標準》（1993年版）規定采用兔法進行熱原檢查外，尚末在國內文獻和雜志上發現對此藥的細菌毒素研究。為此，對注射用鹽酸阿霉素的細菌內毒素檢測方法進行了探討，現報告如下。
1 實驗材料
1.1 鱟試劑 批號200406041，靈敏度0.5EU/ml，0.1ml/支，10支/盒;湛江安度斯生物有限公司。
1.2 細菌內毒素工作標準品 批號0212250，10EU/支，10支/盒;湛江安度斯生物有限公司。
1.3 細菌內毒素檢查用水 批號W2003-3，10×10ml/盒，中國藥品生物制品檢定所。
1.4 注射用鹽酸阿霉素 批號20040416，20040823，20040909，20040103，20040223，20040617，規格10mg/瓶，浙江海正藥業股份有限公司提供，熱原檢查按《浙江省藥品標準》1993年版符合規定。
1.5 儀器與設備
1.5.1 微量移液器 50～250μl，200～1000μl上海求精生化試劑儀器有限公司（MC）。
1.5.2 ZH-2自動漩渦混合器 天津藥典標準儀器廠。
1.5.3 電熱恒溫水溫箱 上海浦東榮豐科學儀器有限公司。
1.5.4 S.C101型鼓風電熱恒溫干燥箱 浙江嘉興市新塍電器廠。
2 方法與結果
2.1 鱟試劑靈敏度標定 按《中國藥典》（2000年版）檢查，用細菌內毒素檢查用水將細菌內毒素工作標準品按1→2等比稀釋成系列濃度的細菌內毒素濃度，然后與鱟試劑混合置37℃水浴60min，用反應終點濃度X計算本批鱟試劑靈敏度，即λ 0 =lg -1 ∑X/4=lg -1 （lg0.5+lg0.5+lg0.5+lg0.25）/4=0.35，因λ 0 在0.5λb～2.0λb之間，故以下實驗λb=0.5EU/ml計。
2.2 細菌內毒素限值計算 參照美國藥典（1995年版）規定細菌內毒素限值為2.2EU/mg將注射稀釋濃度為1.1EU/mg和《浙江省藥品標準》（1993年版），本品熱原檢查注射劑量為2.25mg/ml，1ml/kg注射。本品細菌內毒素理論限值為L（K/D=5EU/2.25mg/ml×1ml/kg×2.25mg/ml=5）。
2.3 本品最大有效稀釋倍數MVD MVD=L/λb=5/0.5=10倍;λb為鱟試劑靈敏度0.5EU。
2.4 干擾試驗 用無菌、無熱0.9%氯化鈉注射液將樣品稀釋成1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶20系列濃度。以各稀釋濃度樣品將細菌內毒素工作標準品按1→2等比稀釋成系列濃度的內毒素濃度，以各稀釋濃度的樣品稀釋的內毒素系列溶液與鱟試劑混和進行抑制增強試驗。結果見表1。6份樣品的反應結果均相同。
2.5 熱原檢查結果 將6批樣品稀釋10倍與0.5EU靈敏度的鱟試劑混合結果均為陰性，而將6批樣品稀釋10倍加入2λ細菌內毒素工作標準品結果均為陽性。6批樣品熱原檢查結果均符合規定。
3 討論
由表1可知，樣品僅對1∶2稀釋液有干擾作用，但在1∶4稀釋時作用消失。與最大有效稀釋倍數比較，說明干擾作用不強。
表1 抑制增強試驗結果（略）
用1∶4稀釋對該廠35批熱原檢查符合規定的樣品進行鱟試劑檢測，結果均符合規定。與美國藥典（1995年版）規定的注射用鹽酸阿霉素濃度稀釋為1.1EU/mg比較，《浙江省藥品標準》（1993年版）制訂的熱原檢查稀釋的2.25mg/ml，注射劑量為1ml/kg，比美國藥典要寬了一倍。因此，在我國建立細菌內毒素方法學時，考慮該品種的質量情況，建議可按美國藥典（1995年版）規定的注射用鹽酸阿霉素細菌內毒素限值為1.1EU/mg為宜。
（編輯:李 弋）
作者單位:318000浙江省臺州市藥檢所
318000浙江臺州浙江海正藥業股份有限公司 |
