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筆者在使用科華公司ELISA HBsAg試劑進(jìn)行血標(biāo)本檢測時(shí)經(jīng)常發(fā)現(xiàn)有多數(shù)孔出現(xiàn)陽性、弱陽性的情況，我院規(guī)定陽性或弱陽性（OD值≥0.060）或（0.105≤OD值≤0.500）都要重新檢測，第2天重新檢測后陽性率降低。筆者經(jīng)過仔細(xì)的分析、研究和多次的試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生假陽性的原因，并得到了解決，使結(jié)果準(zhǔn)確無誤，全年獲得省內(nèi)質(zhì)控優(yōu)秀獎(jiǎng)。 clin-lab.com
1.1 材料 體檢病人標(biāo)本。試劑：科華ELISA HBsAg試劑，批號(hào)20050929；儀器：芬蘭產(chǎn)（thermo labsy stems）酶標(biāo)儀、加樣器。 臨床實(shí)驗(yàn)室 1.2 方法 標(biāo)本用北京產(chǎn)LDZ5—2離心機(jī)離心。離心結(jié)束后，加樣、酶免分析儀中，按照HBsAg試劑說明書的要求，進(jìn)行HBsAg的檢測。離心程序有3個(gè)：（1）轉(zhuǎn)速1800rpm，時(shí)間5min；（2）轉(zhuǎn)速3500rpm，時(shí)間10min；（3）轉(zhuǎn)速3500rpm，時(shí)間15min。 臨床實(shí)驗(yàn)室 2 結(jié)果 clin-lab.com 標(biāo)本檢測結(jié)果見表1。 臨床實(shí)驗(yàn)室 表1 標(biāo)本檢測結(jié)果（略） 臨床實(shí)驗(yàn)室 3 討論 臨床實(shí)驗(yàn)室 經(jīng)過鑒定和校準(zhǔn)的加樣器和酶免分析儀都處于正常狀態(tài)，試驗(yàn)嚴(yán)格按照HBsAg試劑說明書的要求進(jìn)行，試劑的空白和陰、陽性對(duì)照以及室內(nèi)質(zhì)控孔OD值都很正常，只有血液標(biāo)本孔OD值的情況異常，原因在標(biāo)本的離心和血液的放置時(shí)間上。留取檢驗(yàn)標(biāo)本之前，先用金標(biāo)試劑的檢測，檢測的結(jié)果全為陰性，在HBsAg的ELISA檢測中，標(biāo)本的陽性率不應(yīng)該很高。筆者通過增加標(biāo)本的離心時(shí)間和提高離心速度解決了影響試驗(yàn)的關(guān)鍵問題。當(dāng)標(biāo)本在1800rpm離心5min后檢測，每板88份標(biāo)本中有5～10份出現(xiàn)陽性結(jié)果；同一批標(biāo)本3500rpm離心10min后檢測，每板88份標(biāo)本中有0～3份陽性。另一批標(biāo)本在3500rpm離心15min后檢測，每板88份標(biāo)本中也只有0～3份陽性。試驗(yàn)結(jié)論，把標(biāo)本徹底離心分離不溶血，就可得到準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。這說明，標(biāo)本的離心處理好壞直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。 臨床實(shí)驗(yàn)室 為了避免ELISA試劑“檢測時(shí)假陽性的出現(xiàn)”，為了降低檢測的假陽性率，取得準(zhǔn)確的結(jié)果，筆者認(rèn)為可采取下列措施： 臨床實(shí)驗(yàn)室 （1）使用抗凝血標(biāo)本。 clin-lab.com （2）標(biāo)本放置10h后再檢測較好，讓血凝塊更好地收縮，讓標(biāo)本中的非特異性活性物質(zhì)部分或全部失活，降低非特異性反應(yīng)所致的假陽性率但需要時(shí)間較長。 臨床實(shí)驗(yàn)室 （3）離心標(biāo)本檢測之前，要加大離心速度（3500rpm），增加離心時(shí)間，增加離心時(shí)間15min使紅細(xì)胞和纖維蛋白完全沉淀、離心完全。 clin-lab.com （4）從事免疫檢查的實(shí)驗(yàn)室工作人員，必須熟悉有關(guān)標(biāo)本收集和處理的基本知識(shí)，并嚴(yán)格執(zhí)行。 臨床實(shí)驗(yàn)室 （5）標(biāo)記酶的選擇標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包括：活性高、貯存和試驗(yàn)中穩(wěn)定較高的特異性、可溶性、標(biāo)記不喪失活性、無抑制物檢測的方法敏感快捷。 臨床實(shí)驗(yàn)室 （6）嚴(yán)格按照說明書操作進(jìn)行。 clin-lab.com （7）用加樣器加血清或血漿時(shí)不得加入紅細(xì)胞和纖維蛋白，這物質(zhì)影響結(jié)果。 clin-lab.com （8）溶血標(biāo)本不能檢驗(yàn)，應(yīng)重新抽血。 clin-lab.com （9）冬天抽血后最好放置溫水浴中2h血凝塊收縮后再行離心檢測。 臨床實(shí)驗(yàn)室 （10）加終止液時(shí)避免產(chǎn)生氣泡，保證酶標(biāo)板清潔。 臨床實(shí)驗(yàn)室
文章來自臨床實(shí)驗(yàn)室儀器信息網(wǎng)(www.Clin-Lab.Com) - 詳文鏈接：http://www.clin-lab.com/html/linjian/mianyi/201004/25-19300.html |
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