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品牌現貨促銷 http://www.gducity.com/plus/list.php?tid=79 目前，市縣級醫院普遍采用固相酶聯免疫法(ELISA)檢測乙肝5項指標，該法操作方便、快捷，特別適合大批標本的篩查。但由于ELISA方法學特點，批內、批間的CV值較大。因此，做好該項檢測的質量控制是保證結果真實可靠的基礎現就本室開展此項室內質控若干措施和體會報告如下。
1．材料與方法
1.1儀器 RT-2100酶標儀(深圳雷度生產)，附雷度酶標信息管理系統外接軟件，ST-36洗板機購自上海科華實驗系統有限公司。
1.2 試劑 (1)乙肝5項試劑購自上海榮盛生物技術有限公司，批號：HBsAg(20051007)，抗-HBs(20050926)，其余三項皆為20050916。(2)乙肝質控血清購自衛生部臨床檢驗中心，規格分別為0.5ng/ml和1ng/ml的HBsAg，30 mIU/ml 抗-HBS，2 Ncu/ml HBeAg,4 cu/ml抗-HBe和2 Ncu/ml抗-HBC。批號200501。
1.3 方法 乙肝5項指標操作嚴格按說明書要求進行。質控標本-20℃保存，臨用前取出放置室溫融化后和患者標本同時檢測,剩余質控物-4℃冷藏續用，檢驗結果用酶標儀以主波長450 nm，次波長630 nm 比色，結果傳至本地計算機并輸出報告單．質控結果錄入質控信息數據欄，連續記錄3次結果便采用即刻法對第3次數據進行統計、圖形繪出和質控提示，即受控、告警、失控。連續統計2O次在控數據后即改用該軟件的ELISA法即均值法進行統計分析。
2.結 果
乙肝5項檢驗結果采用陰陽性報告并附帶S/C0值，質控項目皆以S/C0進行統計分析，詳見表1～5 (O.5 ng／ml HBsAg的S/C0值在0.5以下，故未作統計)。
目前臨床免疫推薦使用即刻法對乙肝5項指標進行室內質控，它根據Grubbs剔除離群值檢驗的方法演變而來，具體操作是連續檢測3次數值就可以對第3次數值進行均值、標準差、變異系數統計，并根據公式SI=ⅠXn-XⅠ/Sn,Xn為測定值，x為均值，Sn為標準差。)計算一組數據中的某個可疑數值的SI上限值或下限值，與SI界值表中的相應次序的2s或3s的界值進行比較。本室采用的是酶標儀附帶的質控軟件，能自動處理數據、自動繪圖和對各項質控數據進行質控情況提示，較為方便。統計數據顯示：1 ng/ml HBsAg和2 Ncu/ml的抗-HBc存在假在控現象，前者的最大CV值達到55仍在控，而憑經驗應屬于失控狀態；后者則在數據累計至2O次后改用ELISA均值法發現有連續7次結果在x軸一側的趨勢性變化失控，即回顧性分析失控。這些與宋宏先等報道的“即刻法室內質控存在的問題”一致。即刻法室內質控假在控的原因分析：(1)前3次的檢測結果的CV值大小對后續結果的影響很大，前3次的CV大，則后面的檢測值即使出現較大的CV值亦顯示在控；否則會出現假失控。本次統計CV值皆在15以上，故未發現有假失控的現象。陳慧英等采用改良即刻法進行免疫實驗的質控數據統計，即以<25% CV值為控制限來判斷在控與否，這樣便能避免假在控結果的發生。(2)影響ELISA 法實驗精密度除方法學本身的誤差外，日常實驗中酶標儀的性能、洗板的質量、操作者的質量控制意識都是重要因素。我們使用的酶標儀存在孔位效應，第一排的透光不穩定，標準差大；使用連續式檢測方式，存在結果交叉干擾的現象，所以改用步進式檢測方式，雖然檢速慢，但能使穩定性相對提高；我們使用的ST-36W 洗板機沒有蒸餾水清洗程序，使用中發現管道內容易形成絮片狀的菌膜而不完全堵塞針頭，這樣顯色背景明顯加深，出現假陽性,因此每周用次氯酸溶液清洗管道1次，效果很好。另外，操作人員的質量控制意識也很關鍵：注意標本的收取、核對、離心與否，標本問交叉污染，結果的核對，特別是特殊模式的結果一定要用目測加以復核，這些均影響結果的準確性。因此，在實驗中有效控制各種影響因素，是做好患者標本檢測的有力保證，也是室內質控的最終目的。
綜上所述，能將日常乙肝5項指標室內質控工作做好，除積極消除各種影響因素外，選用合適的質控品十分重要，因為乙肝5項指標為免疫定性試驗，統計中發現陰陽性質控品的結果很穩定，如本次統計的全部陽性結果的抗-HBs和HBeAg及陰性結果的抗-HBc，而臨界水平的結果就不穩定，如1ng/ml的HBsAg，即灰區水平，這對血站系統的獻血者篩查尤為重要。因此，明確乙肝各項的具體實驗室檢測靈敏度，采用患者標本制備臨界值質控品并能檢測出符合允許CV值范圍的室內質控結果，應是日后的工作重點。 |
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