問題：如果試劑的體積很小，我該怎么辦？
回答：如果試劑的體積很小，請?jiān)谑褂们皩⒃噭┢侩x心，以確保試劑集中于瓶底。
問題：不按指定的方法保存試劑可以嗎？
回答：不推薦，否則試劑的質(zhì)量無法保證。
問題：可以將不同批號或試劑盒內(nèi)的同一試劑混用嗎？
回答：不可以。
問題：在包被板使用前必須洗嗎？
回答：不是必須，但推薦使用，因?yàn)槿绻÷源瞬襟E精確度可能會降低。
問題：孵育時(shí)間延長或縮短可以嗎？
回答：孵育時(shí)間必須嚴(yán)格按照說明書操作，才能得到最佳的結(jié)果。
問題：實(shí)驗(yàn)必須重復(fù)一次嗎？
回答：不必須，但對于每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品建議做復(fù)孔。
問題：背景色過高是什么原因？
回答：造成背景色過高主要有以下幾點(diǎn)原因：
1）不正確的洗滌
洗滌不充分或省略洗滌步驟中的任何一步均會導(dǎo)致背景色過高。
解決方法：檢查洗滌緩沖液的體積并確保完成所有的洗滌步驟；確保洗滌緩沖液的正確稀釋和正確使用。
2）底物污染
確保在使用前，底物不被金屬離子或氧化劑污染；
在實(shí)驗(yàn)時(shí)留存一些額外的底物
底物本身不應(yīng)該有顏色
3）稀釋液污染
我們的大多數(shù)稀釋液均含有蛋白，在首次開瓶時(shí)可能會造成污染。在從瓶中取液體時(shí)一定要用 “滅菌” 的槍頭
4) 底物曝光
底物曝光會使底物變成蘭色，因此在加入板內(nèi)之前要保存在暗處(即試劑瓶內(nèi))
5) 偶合物的錯(cuò)誤稀釋
偶合物濃度過高會造成高背景色，因此要嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書稀釋
6) 錯(cuò)誤的孵育時(shí)間和溫度
必須嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書來確定孵育時(shí)間和溫度
7) 包被板保存不當(dāng)
如果包被板只用了一部分，一定要正確保存剩余的板條。
問題：測試內(nèi)CV(變異系數(shù))過高是什么原因？
回答：造成測試內(nèi)CV(變異系數(shù))過高主要有以下幾點(diǎn)原因：
1)在洗滌或吸取移液時(shí)，刮擦到板孔內(nèi)部引起包被的抗體脫落
注意在洗滌包被板或吸移標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)不要刮擦到板孔內(nèi)表面。
2)在剝除包被板覆蓋物時(shí)造成孔與孔間的交叉污染
在每次孵育完成時(shí)，一定要小心地剝除包被板覆蓋物，以免孔與孔間的交叉污染。
3)樣品不均一
確保所測試樣品是均一的，在加入包被板前要混勻
4)邊緣效應(yīng)
在孵育時(shí)要封好包被板，并盡可能在100 rpm的振蕩器上孵育。
5)移液器沒有正確校準(zhǔn)
6)在實(shí)驗(yàn)時(shí)，要確保移液器經(jīng)過正確校準(zhǔn)
問題：標(biāo)準(zhǔn)曲線不對是什么原因？
回答：造成標(biāo)準(zhǔn)曲線不主要有以下幾點(diǎn)原因：
1)凍干標(biāo)準(zhǔn)品重懸不正確
確保凍干標(biāo)準(zhǔn)品重懸在正確的液體中，并以正確的體積重懸。重懸體積在說明書和試劑瓶的標(biāo)簽上均有表明
2）重懸時(shí)間過短
確保足夠的時(shí)間，以完全溶解凍干標(biāo)準(zhǔn)品
3）濃縮貯存標(biāo)準(zhǔn)品的不正確稀釋
濃縮貯存標(biāo)準(zhǔn)品要嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書正確稀釋
4）貯存標(biāo)準(zhǔn)品/預(yù)稀釋液的不正確保存
在說明書已注明貯存標(biāo)準(zhǔn)品和預(yù)稀釋液的保存條件，一定要嚴(yán)格按照說明書操作。
5）標(biāo)準(zhǔn)品污染
使用無菌槍頭，保存方法正確可以防止標(biāo)準(zhǔn)品的污染。
6）標(biāo)準(zhǔn)品稀釋時(shí)沒有正確混勻
在系列稀釋標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，要保證每步稀釋時(shí)均正確混勻。
7）檢測波長不正確
要保證分光光度劑的檢測波長是正確的。
8）使用其它批號的標(biāo)準(zhǔn)品
只能使用同一試劑盒內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品，不可以使用其它批號/試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品。
問題：不顯色是什么原因？
回答：造成不顯色主要有以下幾點(diǎn)原因：
1）測試前未將試劑恢復(fù)至室溫
在實(shí)驗(yàn)開始前要將所有試劑恢復(fù)至室溫。
2）某些試劑的不正確保存
所有試劑的保存方法在說明書中均有詳述，要嚴(yán)格依其操作。
3）HRP偶合試劑的污染
在此試劑用前一定要確保無污染。
4）HRP偶合試劑的不正確稀釋
如果HRP偶合試劑濃縮液過度稀釋，則顯色變?nèi)酰凑f明書操作。
5）2組分TMB的不正確混合
按說明書所示比例混合TMB底物，并保證正確混勻
6）省略孵育步驟
說明書中任何一步孵育步驟均不可省略。
7）洗滌后或儲存時(shí)，板孔干燥
洗滌后，在吸水紙上拍打板條以去除多余的洗滌緩沖液，之后要立即進(jìn)行后面的操作步驟或倒口在吸水紙上不超過15分鐘，以免板孔干燥。
8)在洗滌或吸取移液時(shí)，刮擦到板孔內(nèi)部引起包被的抗體脫落
注意在洗滌包被板或吸移標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)不要刮擦到板孔內(nèi)表面。
9）樣品不適合此檢測
在說明書中會列出每種產(chǎn)品的適用標(biāo)本范圍，超出范圍的標(biāo)本可能不適于此試劑盒或者檢測條件需要摸索(如調(diào)節(jié)稀釋度等)
問題：樣品或標(biāo)準(zhǔn)品 “溢值” 是什么原因？
回答：造成樣品或標(biāo)準(zhǔn)品 “溢值” 主要有以下幾點(diǎn)原因：
1)樣品/標(biāo)準(zhǔn)品不正確稀釋
要嚴(yán)格按照說明書來稀釋樣品和標(biāo)準(zhǔn)品。
2)偶合試劑不正確稀釋
要嚴(yán)格按照說明書來稀釋偶合試劑，濃度過高會造成OD的 “溢值” HRP偶合試劑的不正確稀釋
3)所用稀釋液不對
只能使用相應(yīng)試劑盒內(nèi)的稀釋液稀釋樣品和標(biāo)準(zhǔn)品。
4)檢測波長不正確
要保證分光光度劑的檢測波長是正確的。
5)TMB底物的顯色時(shí)間過長
請監(jiān)控顯色時(shí)間。說明書中所示的顯色時(shí)間可能因?yàn)闇囟群推渌鼨z測條件的不同而稍有變化。
6)樣品不適合此檢測
在說明書中會列出每種產(chǎn)品的適用標(biāo)本范圍，超出范圍的標(biāo)本可能不適于此試劑盒或者檢測條件需要摸索(如調(diào)節(jié)稀釋度等)
7)樣品/標(biāo)準(zhǔn)品污染
樣品或標(biāo)準(zhǔn)品的污染可能會導(dǎo)致檢測結(jié)果 “溢值”。
8)孵育時(shí)間/溫度不正確
要嚴(yán)格按照說明書來確定孵育時(shí)間和溫度。
9)在孵育時(shí)為蓋上酶聯(lián)板覆蓋物
在孵育時(shí)需蓋上酶聯(lián)板覆蓋物，以防止液體蒸發(fā)或孵育期間的污染。每個(gè)試劑盒內(nèi)均有足夠數(shù)量的酶聯(lián)板覆蓋物。 |
