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【摘要】 目的 探討C12蛋白芯片檢測在淺表淋巴結轉移癌診斷中的意義。 方法 對已知細胞學診斷的淺表淋巴結組織細胞懸液進行C12檢測，并同時對入選標本患者進行血C12檢測，以病理診斷為最終標準，對以上兩種結果進行對照分析。結果 在35例淺表淋巴結轉移癌中，細胞學的正確診斷率為57.1%(20/35),淋巴結組織細胞懸液C12檢測陽性率為74.3%(26/35),兩者相比差異有統計學意義(P <0.05)；腫瘤組腫瘤標記物（TM）指標CA199、CEA、Beta-HCG、f-PSA、PSA、CA125、HGH、CA153在血和淋巴結組織細胞懸液中含量的比值具有統計學意義(P<0.05)。結論 淋巴結組織細胞懸液C12檢測對淺表淋巴結轉移癌細胞學檢查有一定的輔助診斷價值，但對淋巴結轉移癌的組織學分類靈敏度不高。

【主題詞】  淺表淋巴結轉移癌組織; 細胞學檢查; 腫瘤標志物; 診斷; 蛋白芯片

 

多腫瘤標志物檢測系統是一種集微電子、微機械、化學物理、計算機技術為一體的分析系統，該系統是把多種純化的探針蛋白高密度排列在固定支持物表面上，樣品中的靶蛋白特異性地與探針結合，所以可以對待測蛋白進行定量、定性和功能分析。我國開發的C12蛋白芯片檢測系統，是通過分析血清中12種常用腫瘤標志物 (CA199，NSE，CEA，CA242，Fettitin，Beta-HCG，AFP，PSA,，f-PSA，CA125，HGH，CA153)的含量，聯合檢測以期實現對腫瘤的診斷和檢測^[1]。本實驗旨在通過對已知細胞學診斷的淋巴結組織的進行C12檢測，并與血C12檢測結果進行比較，以病理診斷為最終標準，探討對淋巴結轉移癌診斷中的臨床應用價值。

1.1 標本來源  取自2007年11月～2009年5月我院腫瘤內科門診和住院惡性腫瘤患者35例，其中腺癌20例，鱗癌15例，男20例，女15例，年齡29～81(54.9±12.3)歲；取同期淋巴結良性病變15例作對照組，男9例，女6例，年齡21～64(43.4±14.7)歲；兩組之間性別、年齡具有可比性(P<0.05)。穿刺標本常規作細胞涂片（將吸取物于載玻片上涂勻，95%乙醇固定10 min， HE染色，顯微鏡觀察有無腫瘤細胞及淋巴細胞浸潤），將穿刺針管內殘留的吸取物約0.5～1 ml注入裝有2 ml生理鹽水的10 ml試管中并渦旋混勻，制成組織細胞懸液，置于-20℃保存，標本不夠時再行穿刺。

1.2 主要試劑及方法  取受試者清晨空腹靜脈血3 ml，靜置后分離血清，與淋巴結組織懸液共同采用HD-2001A生物芯片檢測儀及檢測系統進行測定(湖州數康生物科技有限公司)，嚴格按使用說明書操作檢測。

1.3  細胞學診斷 采用HE染色對細針穿刺圖片進行檢測。

1.4  統計學處理 用SPSS 13.0統計軟件進行有關率的χ2檢驗。

2.1腫瘤組和良性病變組C12在淋巴結組織細胞懸液及血中陽性率比較 

在35例淺表淋巴結轉移癌和15例良性病變患者中，淋巴結組織細胞懸液C12檢測的兩樣本陽性率差異具有統計學意義(P <0.05)，提示淋巴結組織細胞懸液C12檢測在淺表淋巴結轉移癌中陽性率大于良性病變組；血C12檢測的兩樣本陽性率差異具有統計學意義(P <0.05)，提示血C12檢測在淺表淋巴結轉移癌中陽性率大于良性病變組。見表1、2。

2.2 腫瘤組和良性病變組C12在血及淋巴結組織細胞懸液中測定結果比較 

腫瘤組CA199、CEA、Beta-HCG、f-PSA、PSA、CA125、HGH、CA153在血和淋巴結組織細胞懸液中含量的比值具有統計學意義(P <0.05)；良性病變組Beta-HCG、 f-PSA、HGH在血和淋巴結組織細胞懸液中含量的比值具有統計學意義(P <0.05)。見表3。

2.3腫瘤組腺癌和鱗癌中的兩種C12測定結果比較 

腺癌和鱗癌在血和淋巴結組織懸液中各項C12指標含量比值差異無統計學意義(P >0.05)，提示 TM陽性與組織學分類無直接相關性。見表4。以病理診斷和血C12檢測標準，在35例淺表淋巴結轉移癌中，淺表淋巴結轉移癌細胞學的正確診斷率為57.1%(20/35),淋巴結組織細胞懸液C12檢測陽性率為74.3%(26/35),兩者相比差異有統計學意義(P <0.05)；腫瘤組淋巴結組織細胞懸液中的TM指標CA199、CEA、Beta-HCG、f-PSA、PSA、CA125、HGH、CA153可以代替該C12蛋白芯片檢測系統在淺表淋巴結轉移癌診斷中的應用價值。       

 

 

表1 腫瘤組和良性病變組淋巴結組織C12檢測結果

淋巴結組織C12	腫瘤組	良性病變組
+	26	5
-	9	10

x2=7.474,P=0.006.

表2 腫瘤組和良性病變組血C12檢測結果

血C12	腫瘤組	良性病變組
+	29	7
-	6	8

x2=6.822,P=0.009.

表3 淋巴結組織和血C12測定結果比較分析( ±s)

血中與淋巴結組織細胞懸液中C12含量測定結果比較：*P<0.05,**P <0.01

表4 腺癌和鱗癌的兩種C12測定結果比較分析( ±s)

血中與淋巴組織結細胞懸液中C12含量測定結果比較：*P<0.05,**P <0.01

蛋白芯片又名蛋白微陣列，就其應用而言分為蛋白功能芯片和蛋白檢測芯片兩種類型^[2]。與傳統蛋白質研究方法相比，它可以在一次實驗中提供相當大的生物信息量，使我們能夠相對全面、準確的研究蛋白表達譜，這是傳統的蛋白質研究方法無法做到的^[3]。蛋白芯片具有高度靈敏性，可以檢測出蛋白樣品中微量蛋白的存在，目前檢測水平已經達到ng/L級^[4]。因為大多數單一指標的生物學信息已遠遠不能滿足臨床診斷和治療的要求,而且缺乏腫瘤特異性,因某些良性疾病也可出現不同程度的陽性反應,為彌補單一標志物在腫瘤檢測特異性和敏感性上的不足,聯合檢測多腫瘤標志物可得到更有價值的信息, C12系統則一次性檢測定12個指標,提高了在腫瘤檢測方面的敏感性和特異性^[5]。蛋白芯片技術目前廣泛應用于各種癌癥的血清學檢測和良惡性胸腹水的診斷中，但少見于對腫瘤組織和淋巴結轉移癌及鑒別腫瘤類型的分析，以使病理診斷更加精確。劉潔瓊等^[6]應用EnvisonTM免疫組化檢測方法對108例膽囊腺癌、46例癌旁組織和35例慢性膽囊炎手術切除標本石蠟包埋切片的CA199和CA125進行分析，結果顯示膽囊腺癌組織中的CA199和CA125的表達陽性率(49.1%、51.9%)明顯高于癌旁組織(26.1%、15.2%)和慢性膽囊炎組織(14.3、5.7%)。如果用免疫組化對腫瘤進行嗜鉻粒蛋白(Cg)、神經特異性烯醇化酶(NSE)等檢測,陽性則支持該腫瘤為神經內分泌來源的診斷,如肺小細胞癌與淋巴瘤的鑒別^[7]。學者^[8]指出:HCG、α-HCG和β-HCG在食管鱗癌中的陽性表達率分別為56.1%、12.2%和34.1% ,這一結果與HCG、β-HCG在肺鱗癌以及HCG、β-HCG在大腸病變中的陽性表達率基本一致。

細胞學診斷因其使用方便、創傷小、診斷快速，近年來成為臨床比較常用的診斷淺表淋巴結疾病的方法，但因取材太少，陽性率不高，臨床應用受到一定限制。本研究中將淺表淋巴結轉移癌制成組織細胞懸液，按照血C12檢測標準對懸液進行C12檢測，并對以上兩種結果進行統計學分析。結果表明：淺表淋巴結轉移癌的細胞學正確診斷率為57.1%(20/35),淋巴結組織細胞懸液C12檢測陽性率為74.3%(26/35),兩者相比差異有顯著性(P <0.05)；淋巴結組織細胞懸液和血中C12檢測在淺表淋巴結轉移癌中陽性率都大于良性病變組；腫瘤組淋巴結組織細胞懸液中的TM指標CA199、CEA、Beta-HCG、f-PSA、PSA、CA125、HGH、CA153可以代替該C12蛋白芯片檢測系統在淺表淋巴結轉移癌診斷中的應用價值。本研究表明，淋巴結組織細胞懸液C12檢測對淺表淋巴結轉移癌細胞學檢查有一定的輔助診斷價值，但對淋巴結轉移癌的組織學分類靈敏度不高。

 

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