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作者：張國慶 王斌 劉振疆 黃艷春 龐作良 摘要：目的：探討3種血清腫瘤標志物甲胎蛋白（AFP）、AFP異質體（AFPL3）和αL巖藻糖苷酶（AFU）聯合檢測對原發性肝癌（PHC）的互補診斷價值及對肝癌早期診斷的意義。方法：對我院2003年7月~2004年3月收治的49例PHC、50例慢性乙型肝炎和20例正常對照聯合檢測AFP、AFPL3和AFU水平，采用電化學發光法測定AFP和AFPL3水平，采用速率法測定AFU水平。結果：PHC組與慢性乙型肝炎組、正常對照組血清AFP水平相比差異有統計學意義（P<0.01）；PHC組與慢性乙型肝炎組和正常對照組的AFP均數相比差異有統計學意義；3項標志物單項檢測的敏感性分別為65.3%、85.7%、49.0%；聯合檢測AFP和AFPL3或AFU可使檢出率提高至92.1%和83.2%；3項指標聯合檢測PHC的檢出率高達97.0%。結論：聯合檢測AFP、APFL3和AFU 3項指標可提高HPC尤其是AFP陰性HPC的診斷效率，對HPC的早期診斷有一定的指導意義。 關鍵詞: 原發性肝癌；甲胎蛋白；甲胎蛋白異質體；αL巖藻糖苷酶；診斷 A study on the combined detection of AFP, AFPL3 and AFU in the diagnosis of primary hepatic cancer ZHANG Guoqing， WANG Bin， LIU Zhenjiang， et al (Department of Surgery, Affiliated Tumor Hospital ,Xinjiang Medical University, Abstract： Objective: To study the complementary value of alpha fetoprotein (AFP), alphafetoprotein variant and αLfucosidase to the diagnosis of primary hepatic cancer. Methods: Serum AFP, alpha fetoprotein variant and αLfucosidase were measured in 49 cases with primary hepatic cancer and 50 cases with chronic hepatitis B and 20 normal cases. The three indices were compared and analyzed for the their complementary diagnostic values to primary hepatic cancer. Results: The diagnostic sensitivities of AFP, alphafetoprotein variant and αLfucosidase to primary hepatic cancer were 65.3%、85.7%、49.0% respectively. Simultaneous determination of AFP and alphafetoprotein variant or αLfucosidase could increase the sensitivities to 92.1% and 83.2% respectively. Furthermore, combines detection of these three indices could make the diagnostic sensitivity as high as 97.0%. Conclusion: The combined assay of serum tumor markers is valuable in the diagnosis of primary hepatic cancer, especially in AFP negative patients. Key words: primary hepatic cancer；alphafetoprotein；alphafetoprotein variant；αLfucosidase；diagnosis 原發性肝癌（PHC）是一種惡性程度高、進展快、預后差、侵襲性強的惡性腫瘤。甲胎蛋白（AFP）是診斷PHC的重要指標，但30%～40%的PHC患者AFP陰性，因此尋找更特異、敏感的腫瘤標志物和診斷方法是研究肝癌的重要課題［1］。大多數單個標志物檢測敏感性和特異性都偏低，近年來提倡多種標志物聯合檢測以提高檢測的靈敏度和特異度。本文對我院2003年7月~2004年3月收治的49例PHC、50例慢性乙型肝炎患者和20例正常對照聯合檢測AFP、AFP異質體（AFPL3）和αL巖藻糖苷酶（AFU）水平，以觀察各標志物對PHC的互補診斷價值及早期診斷的意義，尤其是AFP陰性的PHC患者的檢出率，為進一步治療PHC提供依據。 1資料與方法 1.1臨床資料我院2003年7月~2004年3月收治的49例疑為PHC的患者，后經病理診斷證實為PHC患者(PHC組)；50例慢性乙型肝炎患者為第一附屬醫院傳染科患者（慢性乙型肝炎組）；20例本院健康體檢者作為正常對照組。3組的年齡、性別等一般資料經檢驗具有均衡性。 1.2方法患者入院后1周內清晨空腹抽取靜脈血2 ml，迅速分離血清，-20℃貯存備測，測定前取出標本，待自然復融后檢測血清中AFPAFPL3和AFU水平。采用2010型電化學發光免疫分析儀（羅氏寶靈曼公司）及配套AFP化學發光免疫試劑測定AFP；采用AFU速率法檢測試劑盒在CX9全自動生化分析儀（德國貝克曼公司）上測定AFU；采用親和吸附法測定并計算AFPL3［2~4］。結果判斷：血清AFP>25 μg/L為陽性，血清AFU>40 U/L為陽性，血清AFPL3>25%為陽性。 1.3統計學處理使用SPSS 10.0統計軟件包對數據進行統計學處理。各組均數之間的差異比較采用秩和檢驗，各組之間陽性率比較采用χ2檢驗，檢驗水準α＝0.05。 2結果 49例PHC患者AFP、AFPL3、AFU檢測結果顯示，AFP、AFU均為陰性，而AFPL3為陽性且經病理證實為PHC者9例，約占AFPL3陽性總數的21％。其中1例CT檢查及病理切片顯示，病灶直徑小于3 cm，為早期病變。 2.13組AFP、AFPL3、AFU檢測結果的比較PHC組血清AFP、 AFPL3水平高于正常對照組（P<0.001），PHC組AFP水平明顯高于慢性乙型肝炎組（P0.001）(表1)。 表13組血清AFP、APPL3、AFU水平檢測結果（略） 2.23組AFP、 AFPL3、AFU陽性檢出率PHC組AFPL3的陽性率為85.7%,AFP陽性率為65.3%，AFU陽性率最低，為49.0%(表2)。 表23組AFP、AFPL3、AFU陽性檢出率（略） 2.33組AFP與AFPL3聯合檢測結果 PHC組患者血清AFPL3檢出率較AFP略高，但特異性不高(表3)。 表33組AFP與AFPL3檢測結果[略] 2.4AFP、AFPL3、AFU聯合檢測PHC陽性檢出率3種方法聯合檢測PHC，陽性檢出率達97.0%，且可避免單項檢測出現的漏檢情況(表4)。 表4AFP、AFPL3、AFU聯合檢測PHC陽性檢出率檢測[略] 3討論 3.1AFPAFP是一種糖蛋白，每分子含兩條復合糖鏈，不同組織合成的AFP糖鏈組成不同。基于其蛋白質部分的癌胚性，臨床采用放射免疫、酶聯免疫吸附技術測定AFP的蛋白部分，將其作為肝臟惡性腫瘤診斷的指標，是一種目前公認的診斷肝癌的最佳標志物［5］，作為PHC的輔助診斷指標應用較廣，但有30%～40%的肝癌患者血清AFP呈陰性而被漏診。本組PHC患者AFP陽性率為65.3%，與國內外文獻報道的60%～70%相近［6,7］。 3.2AFPL31970年，Purves等［8］首先應用淀粉凝膠電泳分離出人的AFP異質體。扁豆凝集素（LCA）反應性AFP與LCA結合位點是門冬酰胺連接的巖藻糖化AFP，在植物凝集素親和性電泳中位于第三區帶，稱AFPL3［9］。AFP分子存在異質性，尤其是糖鏈的差異較大，導致一些PHC患者AFP檢測陰性或持續低濃度陽性。PHC患者血清AFPL3含量平均為（49.13±27.20）%（0～100%），非癌肝病患者血清APFL3含量為（93.30±7.66）%，假陽性率為1.6%，PHC患者AFP常升高，但許多良性肝病也可有AFP升高，單憑AFP結果有時很難區分良惡性病變［1,5,6］。檢測APFL3水平尤其對于AFP 30～400 μg/L者具有較好的診斷價值，屠振興等［10］報道35例肝癌病人中只有7例AFP>400 μg/L，而17例AFP<400 μg/L及B超、CT檢查陰性的PHC患者檢測APFL3后可立即確診，至少縮短2個月的隨訪期。 3.3AFUAFU屬溶酶體酸性水解酶類， AFU超過40U/L應考慮PHC。本組PHC患者AFU陽性率為49.0%，較楊桐樹等［11］報道的60%低，分析原因有：（1）是本組病例數較少;（2）所用試劑為進口試劑國內分裝而致純度不足。但在AFP陰性的17例中有8例AFU陽性，兩者互為補充，可提高PHC的檢出率。 3.4AFP、AFPL3、AFU聯合檢測49例PHC患者AFP、AFPL3聯合檢測陽性率為92.1%，AFPL3、AFU聯合檢測陽性率為89.6%，AFP、AFU聯合檢測陽性率為83.2%，三者聯合檢測陽性率為97.0%。PHC患者血清AFPL3檢出率較AFP略高，但特異性不高，3項標志物同時檢測，可明顯提高檢測的特異性和敏感性，其PHC的陽性檢出率可達97.0%。 本研究結果顯示，AFP、APFL3和AFU聯合檢測對PHC診斷有意義，平行試驗可提高檢測敏感度，系列試驗可提高檢測特異度，本組病例AFU值較楊酮樹等［11］報道的低，但能檢出AFP、AFPL3陰性的肝癌患者，具有互補性。AFP、AFPL3和AFU聯合檢測能提高PHC診斷的靈敏度和陽性檢出率，對PHC的早期診斷，尤其是AFP陰性肝癌的診斷具有重要的臨床應用價值。 近年發現血清AFP陰性的PHC有增多趨勢［12］，因此開發更新、更特異、更敏感的標志物已成為緊迫的課題，尋找癌胚特異性的同工酶或異質體，尋找特異性亞組成分成為當前肝癌血清標志物研究的方向。 參考文獻： ［1］湯釗猷.現代腫瘤學［M］.第2版.上海：上海醫科大學出版社，2001. 553. ［2］汪子偉，卓廣超，冷建杭，等.甲胎蛋白異質體的親和吸附法測定［J］.中國腫瘤，2003，12（2）：120121. ［3］張惟杰.復合多糖生化研究技術［M］.第1版.上海：上海科學技術出版社1987.356. ［4］張龍翔，張庭芳，李令媛.生化實驗方法和技術［M］.第2版.北京：高等教育出版社,1997. 177. ［5］沈錚，沈霞.甲胎蛋白及其異質體檢測的臨床應用價值［J］.上海醫學檢驗雜志，2000，15（6）：361362. ［6］王愛華，王華梁，方芳，等.AFP和AFP異質體對405例原發性肝癌的診斷價值探討［J］.上海醫學檢驗雜志，2002，17（2）：8789. ［7］Oka H，Saito A，Ito K，et al. 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