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生物知識

土壤基因組DNA提取試劑盒產品對比

作者:www.gducity.com 來源:網絡 發布時間: 2012-11-30 08:23  瀏覽次數:
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Mpbio與Mo Bio土壤基因組DNA提取試劑盒產品比較

產品描述

FASTDNA®SPIN KIT FOR SOIL(品牌:Mpbio,Cat#:6560200,以下簡寫FastDNA®

UltraClean®Soil DNA Isolation Kit(品牌:Mo Bio,Cat#:12800,以下簡寫UltraClean®

 

 

Qustion 1

試劑盒的工作原理

Response 1兩個試劑盒都是由兩部分組成,一部分是樣品處理階段,重在細胞裂解效果;第二部分就是DNA純化,重在純化和回收效率。試劑盒內的組成成分目的和功能差不多相同,但在處理效果上會差異。

FastDNA®

Lysing Matrix E tube(含裂解基質裂解細胞)

Sodium Phosphate Buffer,MT Buffer(防核酸降解,溶解核酸和蛋白。確保DNA盡量免受RNA污染)

PPS Solution(蛋白沉淀溶液,去除蛋白污染)

Binding Matrix(DNA結合溶液,促進DNA與硅膠結合)

SPIN Modules,Catch Tubes基于硅石的Geneclean離心純化柱,確保DNA的快速洗脫、高純度)

Concentrated SEWS-M(溶解和清洗DNA)

DES(無DNase、熱原質水,確保DNA無降解及無外來熱原質污染)

BBS Gel Loading Dye(基因組DNA上樣緩沖液)

UltraClean®

Bead Solution Tubes(含裂解基質裂解細胞)

Solution S1(含SDS,輔助分解膜上的脂肪酸和脂質)

IRS Solution(用于沉淀腐植酸和其他PCR抑制因子)

Solution S2(含蛋白沉淀試劑,去除蛋白污染)

Solution S3(DNA結合鹽溶液)

Solution S4(清洗DNA,除鹽、腐植酸或其他殘留污物)

Solution S5(溶解DNA并促離心洗脫)

Spin Filter Units in 2 ml Tubes,2 ml Collection Tubes

(基于硅膜的離心純化柱)

Qustion 2

可處理樣本?

Response 2兩個試劑盒的應用范圍都很廣,可用于各種土樣或糞便中的基因組DNA提取。但FastDNA®相對更廣,它已經成功應用于海底沉積物、廢水、雪水等環境樣品中基因組DNA的提取。

可見參考文獻:

Snow sample —Takahiro Segawa et al. (2005). Appl. Envir. Microbiol., Vol 71: 123 - 130.

Sediment —Tracy J. Mincer et al. (2005). Appl. Envir. Microbiol., Vol 71: 7019 - 7028.

Qustion 3

細胞裂解方式及配合使用儀器?

Response 3:兩個試劑盒裂解細胞的方式有所差異,這很大程度影響了基因組DNA提取量及片段的完整性。

FastDNA®

(1)裂解介質是含3種尺寸的顆粒:1.4 mm陶瓷,0.1 mm的硅顆粒,4 mm的玻璃珠混合物,可控的基質顆粒尺寸和數量,保證實驗的可重復性;且不同尺寸保證樣品的充分接觸及受力;

(2)配合FastPrep instrument(Mpbio專有儀器)使用,“8字型”運動方式使得樣品40 s內即可得到充分裂解;更換適配器,可同時處理1—96個樣品。

(3)配合漩渦混勻器或震蕩儀,借助于振動和渦旋式沖擊的混合力裂解細胞,一般作用2~5 min可充分裂解;可同時處理多個樣品。處理方式相對FastPrep儀器溫和,DNA的完整性相對高些。

UltraClean®:

(1)裂解基質是單一玻璃珠;

(2)配合漩渦混勻器使用,借助于渦旋式沖擊和振動裂解細胞,處理方式相對溫和。更換特定的適配器,可同時處理1-96個樣品。樣品一般要處理10min左右,相對輕柔的作用力,可得到較大分子量的DNA,但裂解效果相對差于FastDNA®。

Qustion 4

DNA提取含量及完整性?

Response 4:FastDNA®提取的基因組DNA效率高于UltraClean®,一般同一樣品濃度高3-5倍左右;

參考文獻:fecal specimens —Merlin W Ariefdjohanet al. (2010).Nutrition Journal., Vol 9: 23

Sediment —Gordon Webster et al. (2003). Journal of Microbiological Methods 55:155-164.

         FastDNA®配合FastPrep儀器使用DNA的完整性會相對差于UltraClean®。前者的DNA片段為4-20kb,后者的DNA片段最高達50kb。若不與FastPrep儀器配合使用,DNA的完整性會明顯得到提高,DNA提取率仍高于UltraClean®。

Qustion 5

是否適合高腐殖質樣品的處理?

Response 5兩個試劑盒都有針對高腐殖土樣的特殊處理試劑,從而確保基因組DNA提取不受困擾。(因為腐殖質是土樣中普遍存在的成分,也是干擾DNA和RNA提起的重要因素之一)。

FastDNA®針對高腐殖質的土樣會提供一個特殊的protocol。只需多配制5.5M硫氰酸胍溶液即可保證DNA的高提取效率。

UltraClean®含有IRS Solution(Mobio技術)用來沉淀腐殖酸和一些PCR干擾因子。

Qustion 6:

DNA的純化方式和純度如何?

Response 6兩個試劑盒的純化機制比較類似,都是基于硅膜的離心純化柱純化方式,此純化方式可以有效去除部分腐植酸、鹽和一些殘留污染物,得到的DNA都有較高的純度。

Qustion7

樣品起始量及整個工作時間?

Response 7

FastDNA®一般只需500mg的樣品即可達到需要的DNA;

整個提取過程≤30 min

Response 7:

UltraClean®樣品的起始量為0.25-1.0 gram;

整個提取過程30 min

 

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