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生物知識

克隆/建庫/表達專用超級高效感受態(tài)細胞

作者:www.bilong.com 來源:網(wǎng)絡(luò) 發(fā)布時間: 2012-11-30 08:41  瀏覽次數(shù):
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國外的同學(xué)說一般他們克隆都是直接購買感受態(tài)細胞轉(zhuǎn)化,實驗效率很高的。我總是以為如果是一般的克隆實驗,自己做感受態(tài)好像夠用了--如果是建庫,購買現(xiàn)成的感受態(tài)細胞就是非常必要的首選,因為轉(zhuǎn)化效率確實比實際手工制備的高2-3個數(shù)量級以上,特別是建庫,能實實在在地提高實驗的效率。實際上,除了建庫以外,Stratagene為更好的表達蛋白、以及轉(zhuǎn)化效率較低的巨無霸質(zhì)粒,而特別優(yōu)化了一些感受態(tài)細胞,做表達的人其實可以參考一下,有點用處的。生物通在這里借用Merck公司提供的資料供大家參考。

Stratagene的XL10-Gold®幾乎算得上是高效轉(zhuǎn)化的代名詞了,研究者一旦要克隆大質(zhì)粒、連接DNA和建庫,克隆甲基化DNA,進行藍白斑篩選等,首選的就是XL10-Gold®和其衍生菌。XL10-Gold®用途包括:

--克隆大DNA:包括表達質(zhì)粒,基因組DNA克隆

--構(gòu)建質(zhì)粒文庫:減少DNA大小偏倚性,使全長cDNA克隆、雙雜交質(zhì)粒等各種大小的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化效率更接近,提高文庫代表性(比DH10B高25倍)。

Hte 基因型

Hte(高效轉(zhuǎn)化)基因型是Stratagene開發(fā)的特異性提高大質(zhì)粒、連接DNA的宿主菌基因型,并使細胞生長加快(當(dāng)天獲得菌落),已經(jīng)成功應(yīng)用于25kb超螺旋DNA和8kb連接DNA的克隆。XL10-Gold®,BL21-Gold,BL21-CodonPlus®,SoloPack® Gold 和96Pack® Gold等系列細胞都帶有這個新的性狀。

超級感受態(tài)細胞

Stratagene提供多種>5 x109 轉(zhuǎn)化子/μg 超螺旋DNA轉(zhuǎn)化效率的化學(xué)法超級感受態(tài)細胞正是克隆獲得大質(zhì)粒、連接DNA克隆和建庫時最值得推薦的。

電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞

Stratagene的電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞特別耐受電擊處理,方便好用,在DNA材料極珍貴、量少時,或構(gòu)建有代表性文庫時,建議采用電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞。ElectroTen-Blue®細胞是目前商品化的電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞中效率最高的,達到>3 x1010 轉(zhuǎn)化子/μg 超螺旋DNA。此外XL1-Blue,XL1-Blue MRF’,SURE®,ABLE® 和TG1等細 胞也提供電轉(zhuǎn)化形式感受態(tài)細胞。

SURE®-克隆不穩(wěn)定DNA

大腸桿菌DNA修復(fù)系統(tǒng)會針對重復(fù)序列、二級結(jié)構(gòu)(如Z-DNA)等真核DNA進行重排或刪除修飾。SURE感受態(tài)細胞針對uvrC,umuC,SbcC和RecJ等參與修飾的大腸桿菌基因或蛋白進行突變,提高了真核來源、不規(guī)則DNA的穩(wěn)定性達20倍以上,并且適合克隆甲基化DNA。提供化學(xué)和電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞,效率分別達1x1010 和1x109 。

ABLE®-克隆毒性DNA

目的DNA的蛋白產(chǎn)物常常對細胞產(chǎn)生毒性,通常的解決辦法是采用低拷貝質(zhì)粒,或者采用極為嚴緊的表達調(diào)控。為了獲得穩(wěn)定的克隆,ABLE細胞減少ColE來源質(zhì)粒的拷貝數(shù)(如pUC、pBluescript系列載體),以達到保持相對較高拷貝數(shù)的同時使本底表達對于細胞的毒性降至最低的效果。

MR系列®-克隆甲基化DNA

真核基因組DNA常常因高度甲基化而被大腸桿菌修飾系統(tǒng)切割、刪除,在構(gòu)建文庫時,由于要對cDNA進行甲基化保護,某些cDNA克隆也較難完成。采用Stratagene的MR (Minus Restriction)突變刪除了修飾系統(tǒng)的感受態(tài)細胞,可以構(gòu)建質(zhì)量非常高的cDNA和基因組文庫。這些細胞包括:用于大質(zhì)粒克隆的XL10-Gold®超級感受態(tài)細胞,克隆連接DNA、轉(zhuǎn)化效率 目前最高的ElectroTen-Blue®電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞,單次反應(yīng)包裝的SoloPack® Gold,以及XL2-Blue MRF´ ,XL1-Blue MRF´ Kan(四環(huán)素抗性質(zhì)粒),XL1-Blue MR(沒有F´附加體),克隆有二級結(jié)構(gòu)的SURE細胞等。

重點推薦

Stratagene的ElectroTen-Blue(轉(zhuǎn)化效率>3×1010 )和Novagen的Nova XG Zappers(轉(zhuǎn)化效率>1×1010 )電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞均具有endA-基因型,保證質(zhì)粒優(yōu)質(zhì)高產(chǎn);recA-重組缺陷基因型適合甲基化DNA克隆,確保片段不被刪除或重排;能以IPTG誘導(dǎo)進行藍白斑篩選(lacZΔM15),也使這兩種細胞非常好用。此外,ElectroTen-Blue還可被M13單鏈噬菌體感染(F’)。
 

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