LONZA X-VIVO無血清培養基 網址鏈接 http://www.gducity.com/a/gb2312/news/20121109/4913.html
lonza 特殊 無血清 培養基 網址鏈接
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培養基（Medium）是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養料，一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。有的培養基還含有抗菌素和色素。
無血清培養基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以維持細胞在體外較長時間生長繁殖的合成培養基。但是它們可能包含個別蛋白或大量蛋白組分。雖然基礎培養基加少量血清所配制的完全培養基可以滿足大部分細胞培養的要求，但對有些實驗卻不適合，如觀察一種生長因子對某種細胞的作用，這時需要排除其他生長因子的干擾作用。而血清中可能含有各種生長因子；又如需要測定某種細胞在培養過程中分泌某種物質（抗體、生長因子）的能力；或者要大規模的培養某種細胞，以獲得它們的分泌產物。因此研制出無血清培養基一直是生物科學工作者努力的目標。上海恒利安生物科技有限公司已成功開發了商業化的多種無血清培養基，可滿足眾多廠商的需求。
無血清培養基和試劑被廣泛的應用于培養哺乳動物和無脊動物細胞以制備單克隆抗體，病毒抗原和重組蛋白等。大多數的無血清產品含有向細胞內轉運離子的轉鐵蛋白和調節葡萄糖攝取量的胰島素，以及一些蛋白質如清蛋白，纖連蛋白，胎球蛋白等，這些蛋白在細胞培養中發揮各種不同功能，如吸附毒性化合物，抗生物反應器剪切力，提供細胞貼壁所需的基質，作為脂類和其他生長因子的載體等。
一、無血清培養基的基本配方:基本成分為基礎培養基及添加組分兩大部分。
用于生物制藥和疫苗生產的細胞在體外培養時，多數呈貼壁生長或兼性貼壁生長；而當其在無血清、無蛋白培養基中生長時，由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白，細胞往往以懸浮形式生長。
添加組分包括以下幾大類物質：
(1）促貼壁物質：許多細胞必須貼壁才能生長，這種情況下無血清培養基中一定要添加促貼壁和擴展因子，一般為細胞外基質，如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子，對許多細胞的繁殖和分化，起著重要作用。纖連蛋白主要促進來自中胚層細胞的貼壁與分化，這些細胞包括成纖維細胞、肉瘤細胞、粒細胞、腎上皮細胞、腎上腺皮質細胞、CHO細胞、成肌細胞等。
(2）促生長因子及激素：針對不同細胞添加不同的生長因子。激素也是刺激細胞生長、維持細胞功能的重要物質，有些激素是許多細胞必不可少的，如胰島素。
(3）酶抑制劑：培養貼壁生長的細胞，需要用胰酶消化傳代，在無血清培養基中必不可少須含酶抑制劑，以終止酶的消化作用，達到保護細胞的目的。最常用的是大豆胰酶；抑制劑。
(4）結合蛋白和轉運蛋白：常見如轉鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加比較大，可增加培養基的粘度，保護細胞免受機械損傷。許多旋轉式培養的無血清培養基都含有牛血清白蛋白。
(5)微量元素：硒是最常見的。 二、使用方法:目前，血清仍是動物細胞培養中最基本的的添加物，尤其是在原代培養或者細胞生長狀況不良時，常常會先使用有血清的培養液進行培養，待細胞生長旺盛以后，再換成無血清培養液。細胞轉入無血清培養基培養要有一個適應過程，一般要逐步降低血清濃度，從10%減少到5%，3%，1%，直至無血清培養。在降低過程中要注意觀察細胞形態是否發生變化，是否有部分細胞死亡，存活細胞是否還保持原有的功能和生物學特性等。在實驗后這些細胞一般不再繼續保留，很少有細胞能夠長期培養于無血清培養基而不發生改變的。細胞轉入無血清培養之前，要留有種子細胞，種子細胞按常規培養于含血清的培養基中，以保證細胞的特性不發生變化。
為了使細胞適應無血清培養，關鍵的是使所培養細胞：
●處于對數生長中期
●>90% 活細胞率
●適應時以較高的起始細胞接種
有兩種方法使細胞適應無血清培養基（SFM）:
1. 直接適應——細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基（SFM）中。
一些類型細胞可直接從包含血清的培養基適應無血清培養基。對于直接適應，接種細胞密度應該:2.5×105~3.5×105細胞/ml。當細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml時，傳代培養細胞。當細胞密度在培養4到7天后達到2×106~4×106細胞/ml時，細胞完全適應了無血清培養基。每隔3~5天，當細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml，細胞活率在90％時，貯備的適應了無血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。
2. 連續適應——分好幾步把細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基（SFM）中，與直接適應相比較，連續適應趨向對于細胞更加溫和一些。
●以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養物到75%有血清培養基：25％SFM 混合培養基中，傳代培養。
●當細胞密度>5×105細胞/ml時，以2×105到3×105細胞/ml細胞密度，在有血清培養基：SFM為50∶50的混合培養基中傳代培養。
●以2×106到3×106細胞/ml細胞密度，25％有血清培養基和75% SFM中傳代培養。
●當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml（接種后4到6天），在100％SFM培養基中傳代培養。
●每隔3到5天，當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml，細胞活率在90％時，貯備的適應了無血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。
建議備份前一次混合培養的培養物，直到每一次細胞適應了新的混合培養基。每一次減少血清前，可能需要在SFM/有血清混合培養基中進行幾次傳代。
在適應過程中，最好不要讓細胞生長過度。這將增加選擇亞群的可能性。需要注意，與有血清培養基相比，大部分SFM包含非常少的蛋白質，因而更易于受外界因素的影響。
細胞培養適應替代血清：許多細胞利用連續適應方法能很好的適應，用包含FBS的的培養基和包含有替代血清的培養基1∶1（v∶v）的混合培養基培養細胞。通過下列的混合培養基的方式，連續幾代減少當前培養基的量：1∶2，1∶4，1∶16和100％替代培養基。每次適應改變血清比例時，傳代細胞2到3次。
培養可以直接從FBS轉換到替代血清。一開始就使用相同于FBS的濃度的替代物或血清，生長的延遲可能會發生，4允許進行2到3次的傳代，使生長率恢復到以前的水平。
特別需要強調的是：配制無血清培養液必須使用高質量的水，如石英玻璃蒸餾器經三次蒸餾或超純水凈化裝置制備的水。因為無血清培養基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保護細胞的大分子，既便水中的有毒物質含量甚微，也可能對細胞產生致死性損害。這是無血清培養能否成功的關鍵因素之一。
三、使用無血清培養基的優點
●增加確定性
●性能更加一致
●容易進行純化和下游加工
●細胞功能的精確評估
●增強生長和/或產量
●生理反應性的較好對照
●增強細胞內中介物的檢測
無血清培養基種類：
①UltraCULTURETM培養劑
UltraCULTURE MEDIUM(Serum-free general purpose medium)
簡介：一種通用的無血清培養劑
適用范圍：培養貼壁和懸浮哺乳動物細胞，疫苗生產中病毒顆粒的制備
②PC-1TM培養基
PC-1Complete Serum-free Medium 5
PC-1 Complete Serum-free Medium(powder plus supplement)
PC-1 Supplement (50)
簡介：是一種低蛋白，無血清培養基。PC-1培養基旨在應用于各種研究和工業用途，使用限定成份配制的培養基確保在維持最低蛋白成分同時使細胞獲得最佳的生長狀態。
適用范圍：培養原代細胞和貼壁依賴性細胞
③UltraMEM Reduced Serum培養基
UltraMEM Reduced Serum Medium
(Low-protein medium containing L-glutamine &ITES)
UltraMEM Reduced Serum Medium
(Protein-free basal medium without L-glutamine)
簡介：用于支持多種貼壁信賴性細胞在低血清濃度下的正常生長的限定培養基。
適用范圍：培養貼壁信賴性細胞
④UltraCHOTM培養基
UltraCHO Meidum(1*liquid with L-glutamine) 1L
UltraCHO Meidum(1*liquid without nucleosides) 500mL
UltraCHO Supplement(Non-sterile) 100ml
簡介：培養基最適于培養轉染和未轉染的中國倉鼠卵巢細胞（CHO）細胞，表達重姐蛋白質。
適用范圍：培養CHO細胞; 重組蛋白的合成。
⑤UltraMDCKTM培養基
UltraMDCK Meida
簡介：是一種無血清限定培養劑，適于高/低平板密度培養MADIN-DABBY犬腎細胞（MDCK）
適用范圍：培養供體外診斷（IVD）用的MDCK細胞
⑥Pro293TMCDM系統
PRO 293A-CDM
1PRO 293S-CDM
簡介：用于293細胞（轉化的人胚腎細胞）培養Pro293限定培養基系統是專為促進293細胞重組蛋白的合成和下游反應而開發的。這些配方不需要任何動物來源的成分即可支持高密度的培養
適用范圍：293細胞重組蛋白和合成
⑦Insect-XPRESSTM培養基
Insect-XPRESS Medium
簡介：采用一種無蛋白配方，適合培養來源于Spodoptera frugiperda(Sf9和Sf21)的昆蟲細胞系。
適用范圍：桿狀病毒的增殖，重組蛋白的表達。
⑧HL-1TM完全無血清培養基
HL-1 Complete Serum-free Medium(powder) 10L
簡介：HL-1TM完全無血清培養基是一種限定培養基，蛋白含量低于30ug/ml. HL-1TM完全無血清培養基不含牛血清白蛋白和其它不明蛋白混合物。
適用范圍：雜交瘤細胞和淋巴細胞來源的分化細胞的無血清培養。
⑨UltraDOMATM培養基
BUltraDOMA Medium 500ml
簡介：適用于中空纖維反應器中進行中，鼠和嵌合雜交瘤細胞的培養及上述細胞的批量培養。
適用范圍：雜交瘤細胞的培養，單克隆抗體的制備。
⑩UltraDOMA-PFTM無蛋白培養基
UltraDOMA-P.F.Protein-free Medium
簡介：一種不含蛋白的培養基，適于鼠，人和嵌合細胞來源的雜交瘤細胞系的培養。
適用范圍：雜交瘤細胞和骨髓瘤細胞的培養，單克隆抗體的制備。
11. X-VIVO培養基
X-VIVO 10
X-VIVO 10 with Gentamicin and Phenol Red
X-VIVO 10 w/o Gentamicin and Phenol Red
簡介：為了有助于在無血清環境中制備淋巴因子激活的殺傷細胞(LAK)而設計的。
X-VIVO 15
X-VIVO 15 with Gentamicin and Phenol Red
X-VIVO 15 w/o Gentamicin or Phenol Red
簡介：在組成上和X-VIVO 10相似，并且經過調整優化使之適合于無血清條件下腫瘤浸潤淋巴細胞（TIL）的增殖，其配方有助于外周學及人類腫瘤中分離純化的CD3+細胞的增殖。同時還用于維持人類單核細胞、巨噬細胞及細胞系、粒細胞和自然殺傷細胞（NK）的生長。
X-VIVO 20
X-VIVO 20 with Gentamicin and Phenol Red, 1 L
簡介：經過改進和優化有助于單核細胞耗竭的高密度的外周淋巴細胞制備LAK細胞。
存儲條件：2℃-8℃
三種培養的部分細胞類型應用如下：
人和鼠淋巴因子激活殺傷細胞（LAK）；外周血淋巴細胞（PBL）；人和鼠腫瘤浸潤淋巴細胞（TIL）；人T細胞；人和鼠巨噬細胞；人和鼠造血干細胞（克隆形成和增殖）；人體組織的冰凍保存。
X-VIVO 產品的其他應用包括：
PBL的增殖；TIL的增殖；器官的冰凍保存和移植；人單核細胞和巨噬細胞的培養；干細胞的培養；樹突狀細胞的培養。
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