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耐熱dna聚合酶多應(yīng)用在PCR技術(shù)中。各種耐熱DNA聚合酶均具有5'-3'聚合酶活性，但不一定具有3'-5'和5'-3'的外切酶活性。3'-5'外切酶活性可以消除錯(cuò)配，切平末端;5'-3'外切酶活性可以消除合成障礙。由于上述這些不同，可以將耐熱DNA聚合酶分為三類： 一、普通耐熱DNA聚合酶 taq DNA 聚合酶 由一種水生棲熱菌yT1株分離提取出，是發(fā)現(xiàn)的耐熱DNA聚合酶中活性最高的一種，達(dá)200,000單位/mg。具有5'-3'外切酶活性，但不具有3'-5'外切酶活性，因而在合成中對(duì)某些單核苷酸錯(cuò)配沒有校正功能。 TaqDNA聚合酶還要具有非模板依賴性活性，可將PCR雙鏈產(chǎn)物的每一條鏈3'加入單核苷酸尾，故可使PCR產(chǎn)物具有3'突出的單A核苷酸尾;另一方面，在僅有dTTP存在時(shí)，它可將平端的質(zhì)粒的3'端加入單T核苷酸尾，產(chǎn)生3'端突出的單T核苷酸尾。應(yīng)用這一特性，可實(shí)現(xiàn)PCR產(chǎn)物的T-A克隆法。 Tth DNA 聚合酶 從Thermus thermophilus HB8中提取而得，該酶在高溫和MnCl2條件下，能有效地逆轉(zhuǎn)錄RNA;當(dāng)加入Mg2+后，該酶的聚合活性大大增加，從而使cDNA合成與擴(kuò)增可用一種酶催化。 二、高保真DNA聚合酶 pfu DNA 聚合酶 是從Pyrococcus furiosis中精制而成的高保真耐高溫DNA聚合酶，它不具有5'-3'外切酶活性，但具有3'-5'外切酶活性，可校正PCR擴(kuò)增過程中產(chǎn)生的錯(cuò)誤，使產(chǎn)物的堿基錯(cuò)配率極低。PCR產(chǎn)物為平端，無3'端突出的單A核苷酸。 Vent DNA 聚合酶 該酶是從Litoralis棲熱球菌中分離出的，不具有5'-3'外切酶活性，但具有3'-5'外切酶活性，可以去除錯(cuò)配的堿基，具有校對(duì)功能。 三、DNA序列測(cè)定中應(yīng)用的耐熱DNA聚合酶 Bca Best DNA 聚合酶 從Bacillus Caldotenax YT-G菌株中提純，并使其5'-3'外切酶活性缺失的DNA聚合酶。它的伸長(zhǎng)性能優(yōu)越;可抑制DNA二級(jí)結(jié)構(gòu)形成，可以得到均一的DNA測(cè)序帶。 Sac DNA 聚 從酸熱浴流化裂片菌中分離，無3'-5'外切酶活性，可用于DNA測(cè)序，但測(cè)序反應(yīng)中ddNTP/dNTP的比率要高。 |
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