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生物知識

實驗室常用6種耐熱DNA聚合酶總結

作者:admin 來源:百度百科 發(fā)布時間: 2014-03-11 09:00  瀏覽次數(shù):
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耐熱dna聚合酶多應用在PCR技術中。各種耐熱DNA聚合酶均具有5'-3'聚合酶活性,但不一定具有3'-5'和5'-3'的外切酶活性。3'-5'外切酶活性可以消除錯配,切平末端;5'-3'外切酶活性可以消除合成障礙。由于上述這些不同,可以將耐熱DNA聚合酶分為三類:

一、普通耐熱DNA聚合酶

taq DNA 聚合酶

由一種水生棲熱菌yT1株分離提取出,是發(fā)現(xiàn)的耐熱DNA聚合酶中活性最高的一種,達200,000單位/mg。具有5'-3'外切酶活性,但不具有3'-5'外切酶活性,因而在合成中對某些單核苷酸錯配沒有校正功能。

TaqDNA聚合酶還要具有非模板依賴性活性,可將PCR雙鏈產(chǎn)物的每一條鏈3'加入單核苷酸尾,故可使PCR產(chǎn)物具有3'突出的單A核苷酸尾;另一方面,在僅有dTTP存在時,它可將平端的質粒的3'端加入單T核苷酸尾,產(chǎn)生3'端突出的單T核苷酸尾。應用這一特性,可實現(xiàn)PCR產(chǎn)物的T-A克隆法。

Tth DNA 聚合酶

從Thermus thermophilus HB8中提取而得,該酶在高溫和MnCl2條件下,能有效地逆轉錄RNA;當加入Mg2+后,該酶的聚合活性大大增加,從而使cDNA合成與擴增可用一種酶催化。

二、高保真DNA聚合酶

pfu DNA 聚合酶

是從Pyrococcus furiosis中精制而成的高保真耐高溫DNA聚合酶,它不具有5'-3'外切酶活性,但具有3'-5'外切酶活性,可校正PCR擴增過程中產(chǎn)生的錯誤,使產(chǎn)物的堿基錯配率極低。PCR產(chǎn)物為平端,無3'端突出的單A核苷酸。

Vent DNA 聚合酶

該酶是從Litoralis棲熱球菌中分離出的,不具有5'-3'外切酶活性,但具有3'-5'外切酶活性,可以去除錯配的堿基,具有校對功能。

三、DNA序列測定中應用的耐熱DNA聚合酶

Bca Best DNA 聚合酶

從Bacillus Caldotenax YT-G菌株中提純,并使其5'-3'外切酶活性缺失的DNA聚合酶。它的伸長性能優(yōu)越;可抑制DNA二級結構形成,可以得到均一的DNA測序帶。

Sac DNA 聚

從酸熱浴流化裂片菌中分離,無3'-5'外切酶活性,可用于DNA測序,但測序反應中ddNTP/dNTP的比率要高。

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