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生物知識

鱟試劑分類及選購-內毒素檢測新手必看

作者:admin 來源:網絡 發布時間: 2015-01-10 21:33  瀏覽次數:
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鱟試劑分類及選購-內毒素檢測新手必看
顯色基質鱟試劑、凝膠法鱟試劑、特異性鱟試劑、動態濁度法鱟試劑、比色法鱟試劑、顯色法鱟試劑、動態顯色法鱟試劑、濁度法鱟試劑 、動態比濁法鱟試劑、棄G因子鱟試劑、終點顯色法鱟試劑...。

如果你是一位剛準備做細菌內毒素檢測的實驗人員,看到有這么多種鱟試劑,是不是有個疑問:“這么多種鱟試劑,我該怎么選擇呢?”
別急,不要被這么多名字嚇到了,以下為您詳細分類介紹;
首先,知道什么是鱟試劑。鱟試劑是從棲生于海洋的節肢動物“鱟”的蘭色血液中提取變形細胞溶解物,經低溫冷凍干燥而成的生物試劑,專用于細菌內毒素檢測。

按原料來源分:
全世界有5個種屬的鱟,其中僅有中國鱟(又名三刺鱟)Tachypleus tridentatus Leach和美洲鱟

Limulus polyphemus Linnaeus可制造鱟試劑,對應生產出來的鱟試劑分別為中國鱟鱟試劑
(Tachypleus Amebocyte Lysate),縮寫為TAL;美洲鱟鱟試劑(Limulus Amebocyte Lysate),
縮寫為LAL。TAL與LAL有相同的功效。

按方法分:
中國藥典2005年版中收錄了2種細菌內毒素檢查法,即凝膠法和光度測定法,后者包括濁度法和
顯色基質法。供試品檢測時,可使用其中任何一種方法進行試驗。當測定結果有爭議時,除另有
規定外,以凝膠法結果為準。
05年中國藥典附錄細菌內毒素檢查法詳見http://www.houshiji.com/newslist.asp?newsid=135&sort=2

凝膠法系通過鱟試劑與內毒素產生凝集反應的原理來定性檢測或半定量內毒素的方法。凝膠法鱟試劑常見規格為0.1ml/支或0.5ml/支或者更大裝量,使用時應加無熱原水(細菌內毒素檢查用水)復溶后使用。2005年版藥典中凝膠法鱟試劑結果的判斷:保溫60分鐘±2分鐘后觀察結果。部分商家所說的半小時出結果的快速凝膠法鱟試劑是沒有依據的,沒到時間就觀察結果可能導致假陰性。特異性鱟試劑(又叫棄G因子鱟試劑)是凝膠法鱟試劑的一種,細菌內毒素及β-葡聚糖均能與鱟試劑發生凝聚反應。特異性鱟試劑就是屏蔽β-葡聚糖引起的鱟試劑凝聚反應,使鱟試劑僅與內毒素起反應。一般中草藥注射液成份復雜,干擾因素較多,常含有β-葡聚糖或內毒素類似物。用特異性鱟試劑能減少或消除假陽性反應。(應做對比及干擾試驗)。

光度測定法分為濁度法和顯色基質法,這2種方法都是定量檢測內毒素的。
濁度法系利用檢測鱟試劑與內毒素反應過程過程中的濁度變化而測定內毒素含量的方法。根據檢測原理,可分為終點濁度法和動態濁度法。終點濁度法未見與商品化產品,不再贅述。動態濁度(比濁)法是檢測反應混合物的濁度到達某一預先設定的吸光度所需要的反應時間,或是檢測濁度增加速度的方法。

顯色基質法系利用鱟試劑與內毒素反應過程中產生的凝固酶使特定底物顯色釋放出的呈色團的多少而測定內毒素含量的方法,因使用分光光度計或酶標儀器,又稱為比色法。根據檢測原理,分為終點顯色法和動態顯色法。國內已有顯色基質鱟試劑盒(終點法),早期有上海伊華以鱟三肽為原料做成的鱟試劑盒,廈門鱟試劑廠于2005推出以鱟四肽為原料的鱟試劑盒,也有少量國外產品,但到貨周期長,價格遠高于國產試劑。動態比色法與終點比色基本原理差不多。國產暫無動態比色法,相信很快就會面市。

如果您是藥廠、醫院、醫療器械廠商等單位的實驗人員,僅需要檢測樣品的內毒素限量,則應選擇凝膠法鱟試劑,通過確定內毒素限值及最大有效稀釋倍數,做樣品的干擾試驗從而確定使用的鱟試劑的靈敏度。
如果您需要定量測定樣品中內毒素含量則應選擇顯色基質鱟試劑或動態濁度法鱟試劑。
動態濁度法鱟試劑一般需要配備專用的動態濁度儀或帶有特定軟件的酶標儀,比較適合樣品量較多的用戶(。顯色基質鱟試劑用酶標儀或分光光度計檢測。是樣品數較少(少于200-300個),設備比較簡陋的用戶。如果已有內毒素檢測專用酶標儀,則可選擇顯色基質鱟試劑盒或動態濁度法鱟試劑。
簡單的說,鱟試劑就2種:定性和定量,定性就選凝膠法(特殊產品用特異性鱟試劑)。定量就是顯色法鱟試劑盒或動態濁度法鱟試劑(根據已有儀器定)。如果有動態比色法鱟試劑那就多一種選擇(當然要看成本)。
相信通過以上介紹您對鱟試劑已經有一定了解,聰明的你一定知道如何去選擇鱟試劑了吧!


特別說明:由于環境污染等原因,鱟的數量在不斷減少。臺灣澎湖海洋生物研究中心黃丁士副研究員正在做養殖鱟的研究,他培育出12000尾剛孵化的“一齡鱟”, 60天后有250尾脫殼成“二齡鱟”,僅有少部分“二齡鱟”再經歷2周成為“三齡鱟”。“二齡鱟”到“三齡鱟”的階段存活率只有5%,人工繁殖技術上一直未能突破“三齡鱟”的瓶頸而停滯。日本也曾經劃出鱟保護區,專門用來進行人工養殖鱟,但經過多年實驗以失敗告終。鱟的產卵量很大,但是能活到成年的比例很小。一只鱟必需脫殼15到16次,需要15年達到成年,只有成年鱟才可以采血,因此人工養殖鱟基本上不太可能。部分酒家所謂的人工養殖大多是將成年鱟圈養起來。部分保護動物是可以經營利用的,前提是,被經營利用的必須是這些野生動物經人工養殖繁殖的后代。 因此所有酒家經營的鱟都是非法的。目前日本等國由于鱟的數量減少不得不進口美洲鱟及中國鱟原料來生產鱟試劑。因此,請看到此文的朋友不要吃鱟,也請轉告您身邊的親朋好友保護它。
 

 

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