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生物知識

MP的FastDNA? SPIN Kit for Soil中文說明書

作者：admin 來源：本站 發(fā)布時間： 2015-05-29 19:08　 瀏覽次數(shù)：
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FastDNA® SPIN Kit for Soil (土壤基因組DNA提取試劑盒)

 

FastDNA SPIN Kit for Soil中文說明書

 簡介

       FastDNA® SPIN Kit for Soil的目的是從土壤樣品中提取基因組DNA 供PCR使用在不到30分鐘內(nèi)。快速DNA提取方法排除使用有害的有機溶劑，如苯酚和氯仿。該工具包可在土壤社區(qū)從所有的細菌，真菌，植物和動物的基因組DNA提取。

       該試劑盒包括三個部分：

 

1。裂解

 

Lysing Matrix E tubes中含有的陶瓷和硅粒子，旨在有效地溶解所有不同來源的微生物，包括真細菌孢子和芽孢，革蘭氏陽性菌，酵母菌，藻類，線蟲和真菌。

2。均質(zhì)化試劑

 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer都經(jīng)過精心挑選和準備，使完整的樣本同質(zhì)化和蛋白增溶。試劑能夠以最小的RNA污染提取基因組DNA。

 

3。 DNA純化和洗脫試劑

  

GENECLEAN ?過程是他們用來純化基因組DNA。程序純化DNA用專門的硅膠基質(zhì)的同時消除污染物，抑制并發(fā)反應。

 

* Binding Matrix懸浮

 

      * SEWS-M（鹽乙醇洗，用前加100ml乙醇）

 

* DES（DNA洗脫液超純水）

 

 

試驗方案

 

樣品處理：

 

 

 

  

1。添加500毫克的土壤到Lysing Matrix E Tube。

 

由于FastPrep ?儀器的移動，在管內(nèi)看到大量的聚集。相同Lysing Matrix不應超過管的體積的7 / 8。留在管的空間，也提高了更好的同質(zhì)化的機會。 [見注1] 裂解：

 

加入978μl Sodium Phosphate Buffer 和122μl MT Buffer。 [見注1]

 

2。 在FastPrep ?儀器中混勻40秒的速度6.0。

 

3。14000 XG離心Lysing Matrix E Tubes 5-10分鐘。[見注2]

4。上清轉(zhuǎn)移到一個2ml干凈的管。加入250μlPPS試劑和混合，用手搖動管的10次。

5。 14000 XG離心5分鐘沉淀沉淀。上清轉(zhuǎn)移到一個干凈的15毫升管。 上清液加入1ml Binding Matrix Suspension。 （Binding Matrix在用前重懸均勻） 

 

 

6。放在一個旋轉(zhuǎn)器或手工反轉(zhuǎn)2分鐘，讓DNA結(jié)合基質(zhì)。將管放架上靜置3分鐘，讓硅膠基質(zhì)沉淀。

 

7。小心去除500μL上清，避免碰到沉淀的Binding Matrix。棄上清。重懸Binding

 

TMMatrix在剩余的液體中。約600μl的混合物轉(zhuǎn)移到SPIN Filter，14000 XG離

 

心1分鐘。倒空Catch Tube，并把剩下的上清加到SPINTM Filter中離心過濾。

 

8。添加500μL SEWS-M 到SPINTM Filter，離心1分鐘，在14000 XG。倒出流過液并把SPINTM Filter放回Catch Tube。14000 XG離心2分鐘，在清干SPINTM Filter中的剩余SEWS-M

9。移動SPINTM Filter到新的Catch Tube，室溫下風干5分鐘。

10。加入50-100μL DES輕輕的重懸，輕輕攪動濾膜用槍頭或渦流/手指輕彈，

 

 

  

重懸為高效的DNA洗脫二氧化硅矩陣。在14000 XG離心1分鐘，轉(zhuǎn)移洗脫的DNA到Catch Tube。 DNA是目前應用就緒。

  

 

注釋

 

請閱讀在進行任何FastPrep® DNA提取 之前 1。注1

 

重要：留下約0.25cc的空氣空間。如果留下太少的空氣空間，可能導致樣品的損失，由于管故障或變形。樣品的損失是由溫升FastPrep ?運行期間使壓力增加。在管內(nèi)預留0.25cc空氣空間，足夠防止在例行FastPrep ?運行中樣品損失。 2。注2

擴展到15分鐘的旋轉(zhuǎn)，可增強消除過多的碎片從大量的樣品或從復雜的細胞壁的細胞。

注意：請確認管重量平衡和管的側(cè)面和底部不會刮檫到你的離心壁，因為這將導致樣品的快速流失的重量和平衡。

 

 

 

 

FastDNA® SPIN Kit for Soil (土壤基因組DNA提取試劑盒)

 

 

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