技術(shù)簡介：

TAP/MS是由Co-IP/MS以及GST Pull down-MS發(fā)展而來，三者在尋找鑒定目標蛋白的相互作用蛋白的原理以及方法上非常相似，流程以及效果都要優(yōu)于酵母雙雜交方法。但是，TAP/MS方法經(jīng)過兩步親和純化，而Co-IP/MS以及GST Pull down-MS都只是一步親和純化，所以TAP/MS相比可以有效減少非特異性蛋白的結(jié)合，假陽性率更低。

基本流程：

構(gòu)建含有目的基因的載體，使目的基因與2個不同的表位標簽融合表達，如Flag、HA、Strep、His、CBP、SBP等等。安提海拉生物科技有限公司采用N端 2*strep tag+Flag tag或者C端 6*His tag+Flag tag雙標簽載體；載體轉(zhuǎn)染細胞并表達融合蛋白“2*strep-Flag –目標蛋白”或“6*His-Flag–目標蛋白”；細胞裂解提取總蛋白，經(jīng)streptactin beads或Nickelbeads和Flag M2 beads的兩步純化和洗脫，更大限度了去除了假陽性蛋白。洗脫液進入質(zhì)譜儀，分析鑒定與目標蛋白具有相互作用的蛋白。

技術(shù)優(yōu)勢：

1. TAP/MS得到的相互作用蛋白是在細胞內(nèi)與目標蛋白結(jié)合的，符合體內(nèi)真實生理情況，得到的結(jié)果可信度高。

2.該方法純化條件溫和，不會破壞弱的相互作用，故能得到更多的具有生理意義的相互作用蛋白。

3.采用兩步純化，可以有效的減少非特異蛋白的結(jié)合，并避免因過度沖洗而產(chǎn)生的復(fù)合體解離。

4.有兩端標簽可供選擇，避免某端帶上標簽后功能喪失，擴寬了TAP/MAāS使用范圍。

技術(shù)路線：

慢病毒載體信息：

實驗流程圖：

服務(wù)內(nèi)容:

1.構(gòu)建融合N端 2*strep tag+Flag tag或者C端 6*His tag+Flag taāg的目標蛋白真核表達載體或者病毒載體。

2.載體瞬時轉(zhuǎn)染靶細胞或包裝病毒感染靶細胞。

3.Strep-Flag或6*His-Flag兩步分別純化目標蛋白復(fù)合體。

4.LC-MS-MS鑒定與目標蛋白相互作用的已知或未知蛋白。

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