| Crispr基因敲除細(xì)胞系構(gòu)建主要實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目服務(wù) |
| 序號 |
服務(wù)項(xiàng)目 |
具體描述 |
單價(元) |
實(shí)驗(yàn)周期 |
備注 |
| 2 |
Crispr引物設(shè)計(jì) |
每個基因設(shè)計(jì)2-3對引物 |
300 |
4天 |
包含引物設(shè)計(jì)、合成費(fèi)用 |
| 3 |
gRNA質(zhì)粒構(gòu)建 |
一對引物退火，用T4連接酶將其連接到gRNA載體中 |
900 |
1周 |
包含載體酶切、引物退火、T4連接、轉(zhuǎn)化涂板 |
| 4 |
gRNA質(zhì)粒提取 |
從菌液中提取gRNA質(zhì)粒，測序 |
1200 |
3天 |
包含菌液接種、質(zhì)粒提取，測序驗(yàn)證，無內(nèi)毒素質(zhì)粒提取 |
| 5 |
細(xì)胞培養(yǎng) |
目的細(xì)胞的培養(yǎng)，以備細(xì)胞轉(zhuǎn)染等操作 |
400 |
1周 |
包含細(xì)胞培養(yǎng)、傳代及凍存 |
| 6 |
慢病毒包裝與感染 |
在HEK293T細(xì)胞中將構(gòu)建好的cas9-gRNA表達(dá)質(zhì)粒包裝成慢病毒后感染目的細(xì)胞 |
3000 |
2周 |
包含慢病毒包裝效率的優(yōu)化 |
| 7 |
抗性篩選 |
利用抗性篩選轉(zhuǎn)染陽性的細(xì)胞 |
3800 |
1-2周 |
包含抗性使用濃度和時間的優(yōu)化 |
| 8 |
測序檢測敲除效率 |
細(xì)胞基因組提取，PCR出靶序列，測序檢測 |
1300 |
1周 |
包含基因組提取，目的基因PCR和測序 |
| 9 |
分單克隆細(xì)胞 |
將抗性篩選后得到的細(xì)胞利用有限稀釋法分到96孔板中，獲得單克隆細(xì)胞 |
1400 |
2天 |
包含細(xì)胞消化、細(xì)胞計(jì)數(shù)、96孔板分單克隆 |
| 10 |
單克隆細(xì)胞培養(yǎng)傳代 |
培養(yǎng)96孔板中的細(xì)胞，挑選由單個細(xì)胞長成的細(xì)胞群落傳代擴(kuò)增 |
5000 |
3-5周 |
包含單克隆細(xì)胞挑選、細(xì)胞傳代擴(kuò)增 |
| 11 |
基因敲除細(xì)胞株鑒定 |
WB檢測單克隆細(xì)胞中目的基因的剩余表達(dá)量 |
1600 |
1-2周 |
包含20個單克隆細(xì)胞株樣品制備，WB檢測目的基因和內(nèi)參 |
| 12 |
基因敲除細(xì)胞系凍存 |
擴(kuò)增并凍存基因敲除細(xì)胞系 |
1000 |
1周 |
包含細(xì)胞擴(kuò)增及凍存 |
總計(jì)（元）
|
|
19900 |
6-8周 |
/ |
| 說明：Crispr敲除實(shí)驗(yàn)有一定的風(fēng)險，我們會先做項(xiàng)目分析，比較有把握才會開展后續(xù)實(shí)驗(yàn)，一般會選取2-3個靶點(diǎn)來做，抗性篩選完后確定效率最高的來篩選單克隆細(xì)胞株 |
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