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產(chǎn)品介紹:

qPCR試劑盒 (比對(duì)(BiWriter) 2×SYBR Green PCR試劑盒)

發(fā)布時(shí)間: :2019-02-15 11:21 瀏覽次數(shù): :
產(chǎn)品介紹:
產(chǎn)品規(guī)格: 產(chǎn)品品牌:
參考價(jià)格::
詳細(xì)說(shuō)明:

 

產(chǎn)品概述

        2×SYBR Green PCR Master Mix 是采用 SYBR Green I 嵌合熒光法進(jìn)行 Real Time PCR 的專(zhuān)用試劑。含有常溫下完全封閉 Taq 酶活性的熱啟動(dòng)酶 HS Taq DNA Polymerase,能夠有效抑制低溫條件下引物非特異性退火或者引物二聚體引起的非特異性擴(kuò)增,提高擴(kuò)增反應(yīng)的特異性。本試劑經(jīng)過(guò)特殊配制,采用優(yōu)化配方的qPCR 專(zhuān)用 Buffer,大大提高了 qPCR 反應(yīng)的擴(kuò)增效率和檢測(cè)靈敏度,可以在較寬的定量區(qū)域內(nèi)得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線,準(zhǔn)確進(jìn)行定量。本試劑與多數(shù)廠家的熒光定量 PCR 儀兼容,如 Applied Biosystems、Eppendorf、Bio-Rad 和Roche 等。

 

產(chǎn)品組成

A4004S

A4004M

2×SYBR Green PCR Master Mix

1 mL

5×1 mL

ROX Reference Dye I50×

40 μl

200 μl

ROX Reference Dye II50×

40 μl

200 μl

 

儲(chǔ)存條件:

     本產(chǎn)品-20℃保存有效期至少一年,4℃可保存3個(gè)月。解凍后應(yīng)充分混勻,避免產(chǎn)生大量氣泡。

 

試劑原理:

     本產(chǎn)品利用熱啟動(dòng)酶 HS Taq DNA polymerase 進(jìn)行 qPCR 擴(kuò)增反應(yīng),通過(guò)擴(kuò)增產(chǎn)物嵌合SYBR Green I 而激發(fā)的熒光信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行檢測(cè)。
1、 PCR
     PCR 法是以微量 DNA 進(jìn)行目的片段擴(kuò)增的方法。通過(guò) DNA 鏈的熱變性、引物退火、DNA  聚合酶作用下引物的延伸三個(gè)步驟循環(huán)往復(fù),可在短時(shí)間內(nèi)擴(kuò)增大量 DNA  片段。
2、 熒光檢出
     SYBR Green I 是一種結(jié)合與小溝中的雙鏈DNA 結(jié)合染料,與雙鏈 DNA 結(jié)合后,其熒光大大增強(qiáng),最大吸收波長(zhǎng)約為 497nm,發(fā)射波長(zhǎng)最大約為 520nm。
     SYBR Green I 可以與所有的雙鏈 DNA 相結(jié)合,無(wú)需使用探針,即可實(shí)現(xiàn)檢測(cè),通用性好,且靈敏度很高。但是,由于 SYBR Green I 與所有的雙鏈 DNA 相結(jié)合,因此由引物二聚體、單鏈二級(jí)結(jié)構(gòu)以及錯(cuò)誤的擴(kuò)增產(chǎn)物引起的假陽(yáng)性會(huì)影響定量的精確性。在定量?jī)x器檢測(cè)過(guò)程中,可以通過(guò)測(cè)量升高溫度后熒光的變化,由解鏈曲線來(lái)分析產(chǎn)物的均一性,從而區(qū)分產(chǎn)物的熔解峰溫度而區(qū)分特異與非特異的產(chǎn)物。


使用方法:

反應(yīng)條件
1、 兩步法 
熱啟動(dòng):95℃ 10  分鐘;
變 性:95℃ 10~20 秒;
退火/延伸:60℃ 20~60 秒。   35--45個(gè)循環(huán)
熔解曲線分析。
    
2、 三步法
熱啟動(dòng):95℃ 10  分鐘;
變 性:95℃ 10~20 秒;
退 火:56-64℃ 10~30 秒;
延  伸:72℃  10~60  秒。     35--45個(gè)循環(huán)
熔解曲線分析。
對(duì)于 Roche LightCycler480,熱啟動(dòng)時(shí)間應(yīng)采用 10min,ABI7500 也可以采用 5min 熱啟動(dòng)。

 

qPCR反應(yīng)體系配制:

     建議的模板量 10~100ng(基因組 DNA)或 1~10ng(cDNA 模板)。
 

試劑

20μl 體系

50μl 體系

終濃度

2×SYBR Green PCR Master Mix

10μl

25μl

Primer 110μM

0.42μl

15μl

0.21.0μM

Primer 210μM

0.42μl

15μl

0.21.0μM

Template DNA

4μl

10μl

-

ROX Reference Dyeoptional

0.4μl

1μl

ddH2O

Variable

Varible

-

Total volume

20μl

50μl

-

 

適用機(jī)型:

以下機(jī)型無(wú)需使用ROX Reference Dye校正:

Ø  Roche LightCycler 480Roche Light Cycler 96MJ Research Chromo4MJ Research Opticon 2Takara TP-800Bio-Rad iCycler iQ,Bio-Rad iCycler iQ5,Bio-Rad CFX96,Bio-Rad C1000 Thermal Cycler,Thermo Scientific Pikoreal 96,Qiagen Corbett Rotor-Gene 6000Qiagen Corbett Rotor-Gene G,Qiagen Corbett Rotor-

Gene Q,Qiagen Corbett Rotor-Gene 3000Mastercycler ep realplex

以下機(jī)型進(jìn)行ROX Reference Dye校正模式,需額外添加校正染料:

Ø  使用 ROX Reference Dye I50×PCR 使用時(shí)終濃度為

ABI Prism 7000/7300/7700/7900ABI Step OneABI Step One PlusABI 7900HTABI 7900HT Fast StepOnePlus Real-Time PCR System

Ø  使用 ROX Reference Dye II50×PCR 使用時(shí)終濃度為

ABI Prism 7500ABI Prism 7500 FastABI QuantStudio DX/3/5, ABI QuantStudio 6/7/12K Flex, ABI ViiA 7, Stratagene Mx3000P/Mx 3005P/Mx 4000

 

 

標(biāo)準(zhǔn)GMP生產(chǎn)車(chē)間:

SYBR Green PCR Master Mix 生產(chǎn)和測(cè)試:

質(zhì)量評(píng)估指標(biāo):

1Cq值相比主流品牌差異;

2NTC有無(wú)非特異性擴(kuò)增;

3、擴(kuò)增效率相比主流品牌差異;

4、模板在低拷貝極限下,特異性擴(kuò)增相比主流品牌差異;

5、平臺(tái)期的熒光值相比主流品牌差異;

6、批次之間擴(kuò)增曲線、溶解曲線重復(fù)性情況;

7、模擬運(yùn)輸環(huán)境測(cè)試,產(chǎn)品性能重復(fù)性情況。

 

進(jìn)行人源β-actin擴(kuò)增

 

以人源的CDNA原液進(jìn)行8倍梯度稀釋?zhuān)♂?/span>9個(gè)點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增。

NTC非特異性擴(kuò)增檢測(cè)

擴(kuò)增效率檢測(cè)

模擬4℃冰袋運(yùn)輸4天的性能測(cè)試

測(cè)試結(jié)果描述

1Cq值比主流品牌更優(yōu);

2NTC無(wú)非特異性擴(kuò)增;

3、擴(kuò)增效率比主流品牌更優(yōu);

4、模板在低拷貝極限下,特異性擴(kuò)增和主流品牌一致;

5、平臺(tái)期的熒光值比主流品牌更優(yōu);

6、批次之間擴(kuò)增曲線、溶解曲線表現(xiàn)穩(wěn)定;

7、模擬運(yùn)輸環(huán)境測(cè)試,產(chǎn)品性能表現(xiàn)穩(wěn)定。

 

比對(duì)(BiWriter) 2×SYBR Green PCR試劑盒

 

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