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DH5α Chemically Competent Cell

發布時間: :2020-08-24 20:47 瀏覽次數: :
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詳細說明:

 DH5α Chemically Competent Cell 使用說明書

產品說明:

本品為DH5α感受態細胞,缺失核酸內切酶 (endA),且為重組酶缺陷型(recA),有利于高純度質粒DNA的提取,同時減少插入片段的同源重組概率,確保插入DNA的穩定性,為質粒轉化、基因克隆提高保障。 lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍白斑篩選。DH5α感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率>5×108 cfu/μg

 產品組成:

  

BW-002-a 

BW-002-b 

 DH5α Chemically Competent Cell

10 × 100 µL

50× 100 µL

pUC19control vector10pg/μL

10μL

10μL

 

 

 

 

 

* 基因型F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

儲存條件:

-80℃±10℃保存6個月。請勿將本品置于-20℃或液氮中保存。

使用方法:

1.       將感受態細胞從-80℃冰箱中取出,置于冰水浴中融化。

2.       將目的DNA(質粒或連接產物)加入到100μL感受態細胞中,輕輕彈勻,冰上孵育30分鐘。

3.       42℃水浴熱激45秒后,立刻置于冰上,靜置23分鐘,晃動會降低轉化效率。

4.       向離心管中加入200μL無抗LBTBSOC培養基,混勻后于220rpm37℃搖床振蕩復蘇60分鐘,使轉化物表達抗性基因。

5.       根據實驗要求吸取適量菌液,涂布至相應抗生素的2YTLB培養基上,室溫正置10分鐘,待菌液被平板充分吸收后,37℃倒置培養過夜。

 

注意事項:

1.       感受態細胞冰水浴中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目的DNA,不可在冰上放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。

2.       待轉化DNA加入體積不要超過感受態細胞體積的1/10

3.       待轉化DNA加入感受態細胞后,請勿用移液槍吹打,輕輕彈勻即可。

4.       為確保最高效率轉化,整個操作過程應盡量輕柔,并保持冰上操作。

 

DH5α化學感受態細胞使用說明書

 

 

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